Dallimi kryesor midis primerëve të rastësishëm dhe oligo dT është se abetarja e rastësishme është një përzierje e të gjitha sekuencave të mundshme të oligonukleotideve të heksamerëve, ndërsa primeri oligo dT përbëhet nga një shtrirje me një varg prej 12-18 deoksitimidinash..
Transkriptimi i kundërt është një mekanizëm në të cilin cDNA mund të sintetizohet duke përdorur mRNA ose çdo lloj ARN. Për të prodhuar cDNA, duhet të sigurohet enzima e transkriptazës së kundërt dhe përbërës të tjerë të nevojshëm, veçanërisht shabllon dhe primer. Primerët janë sekuenca të shkurtra të ADN-së të krijuara posaçërisht për amplifikimin e sekuencave të synuara. Primerët e rastësishëm dhe primerët oligo dT janë dy lloje të zakonshme të abetareve që përdoren në transkriptimin e kundërt. Prandaj, primeri i rastësishëm ose primeri oligo dT janë sekuenca të shkurtra oligonukleotide të ADN-së që kërkohen për transkriptazën e kundërt për të filluar transkriptimin e kundërt. Në varësi të shabllonit të ARN-së, abetarja e përshtatshme mund të zgjidhet nga këto dy lloje të abetares.
Çfarë janë Abetaret e rastësishme?
Abetarja e rastësishme është një përzierje e oligonukleotideve që përfaqësojnë të gjitha sekuencat e mundshme të heksamerëve. Sekuenca e primerit të primerit të rastësishëm është 5´ – d (NNNNNN) –3´ N=G, A, T ose C. Prandaj, primerët e rastësishëm mund të përdoren për amplifikimin e ADN-së ose ARN-së njëvargëshe nga ADN polimeraza ose transkriptaza e kundërt, përkatësisht. Përveç kësaj, përzierja e rastësishme e primerit është e aftë të amplifikojë të gjitha rajonet e ARN-së për të gjeneruar cDNA. Kështu, ajo prodhon gjatësi të ndryshme të cDNA.
Figura 01: Abetare të rastësishme
Më e rëndësishmja, përzierja e rastësishme e primerit nuk tregon specifikat e shabllonit. Nuk është në gjendje të dallojë mRNA dhe specie të tjera të ARN-së. Dhe, ajo pjek me çdo lloj ARN në mostër. Megjithatë, përzierja e rastësishme e primerit është e përshtatshme për transkriptimin e kundërt të ARN-ve pa bisht poli(A), të tilla si rARN, tARN, ARN jo-koduese, ARN të vogla, mARN prokariote etj., ARN e degraduar dhe ARN me struktura dytësore të njohura.
Çfarë është Oligo dT?
Abetarja Oligo dT është një shtrirje prej 12 – 18 deoksitiminë (dT). Sekuenca e primerit mund të përfaqësohet si 5´-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT)-3. Përdoret për prodhimin e cDNA nga mRNA që përmban bisht poli(A). Në thelb, ai vepron si një abetare për reagimin e katalizuar nga transkriptaza e kundërt. Gjatë transkriptimit të kundërt, primeri oligo dT pjek me bishtin poli-adeniluar që gjendet në skajin 3' të shumicës së mARN-ve eukariote dhe fillon procesin.
Figura 02: Transkriptimi i kundërt duke përdorur Oligo dT Primer
Ndryshe nga primeri i rastësishëm, primeri oligo dT nuk është i përshtatshëm për ARN ose ARN të degraduar që nuk kanë bisht poli(A), duke përfshirë ARN-në prokariote dhe mikroARN.
Cilat janë ngjashmëritë ndërmjet Abetareve të rastësishme dhe Oligo dT?
- Abetarja e rastësishme dhe primeri oligo dT janë dy lloje primerësh që përdoren në transkriptimin e kundërt dhe krijimin e cDNA.
- Përdorimi i primerit të rastësishëm dhe primerit oligo dT së bashku rrit ndjeshmërinë e sintezës së cADN-së.
- Ato janë sekuenca të shkurtra nukleotide njëvargjeshe.
Cili është ndryshimi midis Primerëve të rastësishëm dhe Oligo dT?
Abetarja e rastësishme është një sekuencë e shkurtër oligonukleotide e përbërë nga një sekuencë e rastësishme. Ndërkohë, primeri oligo dT është një fije e shkurtër e përbërë nga 12 deri në 18 deoksitimidina. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis abetareve të rastit dhe oligo dT. Sekuenca e primerit të rastësishëm është 5´ – d (NNNNNN) –3´ N=G, A, T ose C. Ndërsa, sekuenca e primerit oligo dT është 5´-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT)-3´. Prandaj, ne mund ta konsiderojmë këtë si një ndryshim tjetër midis abetareve të rastit dhe oligo dT.
Për më tepër, abetaret e rastësishme nuk tregojnë specifikat e shabllonit, dhe ato kalojnë me çdo lloj ARN, ndërsa primerët oligo dT tregojnë specifikë për bishtat poli(A) të mRNA eukariote.
Infografia e mëposhtme përmbledh ndryshimin midis primerëve të rastësishëm dhe oligo dT.
Përmbledhje – Abetare të rastësishme kundër Oligo dT
Abetarja e rastësishme dhe primeri oligo dT janë dy lloje primerësh të përdorur në sintezën e cADN-së. Abetarja e rastësishme përbëhet nga një përzierje oligonukleotidesh, që përfaqësojnë të gjitha sekuencat e mundshme të heksamerëve, ndërsa primeri oligo dT është një sekuencë me një fije floku prej 12 deri në 18 deoksitimidinash. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis abetareve të rastit dhe oligo dT. Përveç kësaj, primerët oligo dT janë të dobishëm për transkriptimin e kundërt me gjatësi të plotë të ARN-së me bisht poli(A), ndërsa primerët e rastësishëm janë të dobishëm për transkriptimin e kundërt të shumicës së specieve të ARN-së, duke përfshirë ARN-në e degraduar, ARN që nuk kanë bishta poli(A) dhe ARN që përmbajnë strukturat dytësore. Prandaj, abetarja e rastësishme nuk tregon specifikën e shabllonit ndërsa primeri oligo dT tregon specifikë ndaj mRNA eukariote që përmban bisht poli(A).
