Dallimi kryesor midis GFP dhe EGFP është se GFP është një proteinë e llojit të egër e inkorporuar në klonimin molekular të qelizave jo-gjitarësh ndërsa EGFP është një lloj i përmirësuar ose i modifikuar i GFP që mund të përdoret në qelizat e gjitarëve..
Klonimi molekular është një teknikë e avancuar që shkencëtarët e përdorin jashtëzakonisht shumë në shprehjen e proteinave nëpërmjet teknologjisë rekombinuese. Në teknologjinë e ADN-së rekombinante, është e nevojshme që vektori rekombinant të transformohet me sukses në organizëm pritës. Prandaj, gjatë procesit të transformimit, duhet të identifikohet dhe të konfirmohet nëse gjeni i interesit është transformuar apo jo tek bujtësi. Për ta vlerësuar këtë, biologët molekularë miratojnë disa teknika. Nga këto teknika, njëra është gjen raportues. Këto gjene raportuese veprojnë si shënues të përzgjedhshëm për të zgjedhur transformatorët e duhur. Kështu, proteina fluoreshente e gjelbër (GFP) dhe proteina fluoreshente e zgjeruar e gjelbër (EGFP) janë dy proteina raportuese të përdorura në klonimin molekular.
Çfarë është GFP?
GFP është një proteinë e tipit të egër që përmban 238 mbetje aminoacide dhe disa rajone të përzgjedhshme të sekuencave aminoacide që e dallojnë atë nga proteinat e tjera fluoreshente. Për më tepër, kjo proteinë e tipit të egër fillimisht ishte e izoluar nga Aequorea Victoria; një lloj kandili deti. Megjithatë, në fenomenet natyrore, kandili i detit ishte në gjendje të prodhonte fluoreshencë me ngjyrë të gjelbër në përgjigje të stimujve të caktuar.
Më parë, ky koncept i befasoi shkencëtarët dhe ata vendosën ta përdorin atë në teknologjitë e tyre të ADN-së rekombinuese. Rrjedhimisht, shkencëtarët përdorën këtë formë mutant të gjenit të tipit të egër si një gjen raportues në studimet e tyre të shprehjes së gjeneve. Gjeni i tipit të egër i GFP është i aftë të prodhojë një proteinë e cila jep fluoreshencë në temperaturën e dhomës ose nën dritën UV. Prandaj, kur futet në transformues, ai shpreh dhe prodhon fluoreshencë. Nëse fluoreshenca rezulton pas procesit të transformimit, ajo konfirmon suksesin e procesit të transformimit. Me fjalë të thjeshta, emetimi i fluoreshencës sinjalizon transformimin e suksesshëm të vektorit që mbart gjenin e interesit në host.
Figura 01: GFP
Për këtë arsye, GFP vepron si një shënues in vivo i shprehjes së gjeneve. Aktualisht, teknikat e inxhinierisë gjenetike janë në përdorim për të prodhuar GFP. Gjithashtu, shumë versione të përmirësuara të GFP si EGFP janë në dispozicion. Prandaj, kjo mundëson përdorimin efikas të GFP në klonimin molekular dhe studimet e shprehjes së gjeneve.
Çfarë është EGFP?
Proteina fluoreshente e gjelbër e përmirësuar ose EGFP është një version i përmirësuar i GFP. Me fjalë të thjeshta, ne mund ta përkufizojmë EGFP si një version të inxhinieruar të GFP të tipit të egër. Kur gjeni i tipit të egër i GFP ndryshon, ai prodhon efekte të dobishme. Prandaj, gjeni i mutuar i GFP lejon shprehjen e karaktereve të reja, dhe si rezultat i kësaj, ne mund të prodhojmë GFP të përmirësuar me karakteristika të përmirësuara. Për më tepër, ne mund të prezantojmë me sukses mutacione në gjenin GFP të tipit të egër duke përdorur rrezatim ose metoda kimike. Këto gjene të mutuara më pas prodhojnë EGFP, i cili ka karakteristika më të dobishme.
Figura 02: EGFP
Karakteristikat e përmirësuara të EGFP janë si më poshtë;
- Në gjendje të lëshojë sinjale më të forta fluoreshence.
- Ka ndjeshmëri të lartë.
- Mund ta përdorë atë në qelizat e gjitarëve në vend të prokariotëve dhe eukariotëve të tjerë të nivelit më të ulët.
- Gjithashtu, siguron pastërtinë më të madhe të produktit.
Prandaj, në krahasim me GFP, EGFP është zgjedhja e preferuar për studimet e shprehjes së gjeneve. Megjithatë, produkti është më i shtrenjtë në krahasim me GFP.
Cilat janë ngjashmëritë midis GFP dhe EGFP?
- GFP dhe EGFP janë dy proteina që kanë aftësinë të lëshojnë ngjyrë të gjelbër
- Prandaj, të dyja funksionojnë si proteina raportuese në studimet e shprehjes së gjeneve.
- Gjithashtu, është e mundur të sintetizohen të dyja duke përdorur teknologjinë rekombinante të ADN-së.
- Për më tepër, është e lehtë të ndryshohen më tej këto dy lloje për të sintetizuar forma të përmirësuara.
Cili është ndryshimi midis GFP dhe EGFP?
Geni reporter është një gjen që lidhet me gjenin me interes në teknologjinë e ADN-së rekombinante. Ai sinjalizon transformimin e suksesshëm të vektorit rekombinant në host. Këtu, GFP dhe EGFP janë dy lloje të proteinave floreshente jeshile që funksionojnë si proteina raportuese. Sidoqoftë, ndryshimi kryesor midis GFP dhe EGFP është se GFP është një lloj i egër ndërsa EGFP është një version i inxhinieruar i GFP. Për më tepër, EGFP ka karakteristika më të dobishme se GFP. Për shembull, EGFP prodhon dritë fluoreshente më të fortë dhe është më e ndjeshme se GFP. Një tjetër ndryshim midis GFP dhe EGFP është sistemet në të cilat ne mund t'i përdorim këto. Sistemet jo-gjitarësh përdorin GFP ndërsa sistemet e gjitarëve përdorin EGFP.
Infografia e mëposhtme paraqet ndryshimin midis GFP dhe EGFP në formë tabelare.
Përmbledhje – GFP vs EGFP
GFP dhe EGFP janë proteina raportuese në studimet e klonimit molekular dhe të shprehjes së gjeneve. GFP është proteina e tipit të egër, e cila është një proteinë fluoreshente e gjelbër. Proteina fillimisht ishte e izoluar nga kandili i detit Aequorea victoria. Në të kundërt, EFGP është një formë e përmirësuar e proteinës GFP. Është një mutant i tipit të egër me karakteristika të përmirësuara. Prandaj, EFGP ka fuqinë më të lartë të sinjalit dhe ndjeshmërinë më të lartë. Prandaj, ne mund ta përdorim atë në vektorët e gjitarëve. Në të kundërt, përdorimi i GFP është kryesisht vetëm për vektorët jo-gjitarë. Në përgjithësi, ky është ndryshimi midis GFP dhe EGFP.
