Dallimi midis Benzonazës dhe DNase

2024 Autor: Alex Aldridge | [email protected]. E modifikuara e fundit: 2023-12-17 13:50

Dallimi kryesor – Benzonaza vs DNase

Degradimi i acideve nukleike është i rëndësishëm për shumë teknika të biologjisë molekulare. Përdoret gjerësisht në teknologjinë rekombinante të ADN-së për të hequr qafe fragmentet e padëshiruara të ADN-së dhe ARN-së. Enzimat degraduese të acidit nukleik quhen nukleaza, dhe ato mund të jenë të llojeve të ndryshme bazuar në funksionin e kërkuar. Nukleazat që degradojnë ADN-në njihen si DNase ndërsa ato që degradojnë ARN-në njihen RNase. Këto enzima përdoren më së shumti në eksperimentet in vitro ku kryhen teste molekulare in vitro për të izoluar ADN, ARN ose proteina të pastër. Benzonazat janë një lloj nukleazash që degradojnë si ADN-në ashtu edhe ARN-në, ndërsa DNazet degradojnë vetëm ADN-në. Ky është ndryshimi kryesor midis Benzonazës dhe DNase.

Çfarë është Benzonaza?

Benzonaza është një endonukleazë e modifikuar gjenetikisht nga Serratia marcescens. Kjo enzimë prodhohet në bujtësit E. coli në shkallë industriale. Benzonaza është e aftë të copëtojë ADN-në me dy zinxhirë, ADN lineare, ADN rrethore dhe ARN me një zinxhir. Kështu, Benzonaza është e rëndësishme komerciale. Enzima e benzonazës është një dimer proteinik i cili ka 245 aminoacide identike, nën-njësi ~30 kDa me dy lidhje esenciale disulfide. Benzonaza copëton acidet nukleike në skajin e saj 5' dhe rezulton në fragmente me skajet 5' të lira. Benzonaza mund të ndajë acidet nukleike në çdo sekuencë, por preferon rajone të pasura me GC.

Benzonaza ruhet në -20 ^{0C. PH optimale për aktivitetin e enzimës është gjetur të jetë 8.0 – 9.2. Aplikimet e Benzonazës përfshijnë përgatitjen e mostrës për elektroforezën e xhelit të proteinave 2D ku Benzonaza heq acidet nukleike të lidhura dhe heqjen e ndotësve të acidit nukleik nga preparatet e proteinave rekombinante. Përdoret gjithashtu për të reduktuar viskozitetin e ekstrakteve të proteinave dhe për të parandaluar grumbullimin e qelizave në një përzierje qelizore.}

Çfarë është DNase?

DNaza është një nukleazë, enzimë hidrolitike e cila është në gjendje të copëtojë vetëm ADN-në me dy fije. Ekzistojnë dy lloje kryesore të DNase: DNase I dhe DNase II. DNaza I merr pjesë në ndarjen e ADN-së me dy zinxhirë për të prodhuar polinukleotide me skaje të lira 5'. DNaza II është e përfshirë në ndarjen e ADN-së me dy fije për të prodhuar fije polinukleotide me skaje të lira 3' ose mbingarkesa.

DNase I

DNase I funksionon me një pH optimal midis 7.0 - 8.0. Aktiviteti i enzimës varet nga shumë kofaktorë jonikë, të cilët përfshijnë, Ca²⁺, Mg²⁺ ose Mn^{2+Aktiviteti i Mg}2+ ^{dhe Mn}2+ ^{vendos funksionin e DNase I. Në prani të Mg} 2+^{, DNase I këput çdo varg të dsDNA në mënyrë të pavarur. Kjo ndodh në mënyrë të rastësishme. Në të kundërt, në prani të Mn}2+, ^{enzima këput të dy vargjet e ADN-së në afërsisht të njëjtin vend. Kjo ndarje do të rezultojë në prodhimin e dy llojeve të fragmenteve të ADN-së; një lloj me skajet e hapura dhe një lloj tjetër me një ose dy mbingarkesa nukleotide.}

Figura 02: DNase

DNase II

DNase II funksionon në një pH optimal prej 4,5-5,0 dhe jonet metalike dyvalente kërkohen për aktivitetin e saj, ngjashëm me DNase I. Mekanizmi i DNase II dihet se përbëhet nga tre hapa kryesorë.

1. Ndërprerjet e shumëfishta të vetme të vetme shkaktohen brenda shtyllës kurrizore të ADN-së.
2. Prodhohen nukleotide dhe oligonukleotide të tretshme në acid.
3. Zhvendosja hiperkromatike jolineare ndodh në fazën e fundit.

Inhibitorët kryesorë të enzimës DNase përfshijnë kelatorë metalikë, metale kalimtare dhe kimikate të tilla si dodecil sulfati i natriumit dhe β-merkaptoetanoli.

Zbatimet kryesore të DNase përfshijnë përgatitjen e ekstrakteve të ARN-së pa ADN dhe ekstrakteve të proteinave dhe heqjen e ADN-së shabllon gjatë eksperimenteve të transkriptimit in vitro.

Cilat janë ngjashmëritë midis Benzonazës dhe DNazës?

• Të dyja janë enzima hidrolitike.
• Të dyja janë nukleaza.
• Të dy marrin pjesë duke shkëputur lidhjet fosfodiesterike të acideve nukleike.
• Të dyja kërkojnë një pH optimale dhe temperatura të ruajtjes për të ruajtur aktivitetin e enzimës.
• Inhibitorët e enzimave përfshijnë agjentë kelues, metale kalimtare dhe kimikate detergjente.
• Aplikimet përqendrohen kryesisht në marrjen e ekstrakteve të pastërtisë së lartë të ADN-së, ARN-së dhe proteinave.
• Të dyja enzimat mund të prodhohen nëpërmjet inxhinierisë gjenetike.

Cili është ndryshimi midis Benzonazës dhe DNazës?

Benzonaza vs DNase
Benzonaza është një enzimë që është e aftë të copëtojë ADN-në me dy zinxhirë, ADN lineare, ADN rrethore dhe ARN.	DNaza është një enzimë që është e aftë të copëtojë ADN-në me dy zinxhirë.
Substrat për enzimën
Si ADN-ja dhe ARN-ja janë substrate për benzonazën.	ADN është substrati për DNase.
Struktura
Diapazoni optimal i pH i benzonazës është 7.0 -8.0	Sferat optimale të pH-së së DNazës I është 7,0 – 8,0 dhe DNaza II është 4,5 – 5,0.

Përmbledhje – Benzonaza vs DNase

Enzimat nukleaza përdoren gjerësisht në procedura të ndryshme eksperimentale në lidhje me biologjinë molekulare dhe inxhinierinë gjenetike. Benzonaza dhe DNaza janë dy lloje nukleazash. Benzonaza është e përfshirë në degradimin e ADN-së dhe ARN-së ndërsa DNaza është e përfshirë në ndarjen e ADN-së me dy fije. Ky është ndryshimi themelor midis benzonazës dhe DNase. Aktualisht, të dy këto lloje nukleaza prodhohen përmes teknologjisë së ADN-së rekombinante e cila jep një enzima me cilësi më të lartë që janë të optimizuara për prodhimin maksimal.

Shkarko versionin PDF të Benzonase vs DNase

Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimit të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Dallimi midis Benzonazës dhe DNase