Dallimi kryesor midis Klenow dhe T4 ADN polimerazës është se fragmenti Klenow është një fragment i madh i E. coli ADN polimerazës 1 ndërsa T4 ADN polimeraza është ADN polimeraza 1 e bakteriofagut T4.
Polimerazat e ADN-së janë enzima që katalizojnë formimin e ADN-së duke shtuar deoksiribonukleotide në skajin 3'-OH të një primeri para-ekzistues. Ekzistojnë lloje të ndryshme të polimerazave të ADN-së. Shumica e polimerazave të ADN-së të përdorura në biologjinë molekulare janë polimeraza prokariotike të ADN-së. Fragmenti Klenow dhe polimeraza e ADN-së T4 janë dy lloje të polimerazave të ADN-së që kanë një origjinë prokariote. Fragmenti i Klenow është fragmenti i madh që krijohet nga ndarja e E.coli ADN polimeraza 1 në dy fragmente nga subtilisin proteazë bakteriale. T4 ADN polimeraza është ADN polimeraza 1 e bakteriofagut T4. Të dy Klenow dhe T4 ADN polimeraza kanë aktivitet 5'→3' polimerazë dhe 3'→5' ekzonukleazë. Të dyve u mungon aktiviteti i ekzonukleazës 5'→3', duke i bërë ato më të përshtatshme për shumë aplikime në biologjinë molekulare.
Çfarë është Klenow?
Fragmenti Klenow është një polimerazë e ADN-së që është e dobishme në biologjinë molekulare. Kur E. coli ADN polimeraza 1 i nënshtrohet tretjes proteolitike nga proteaza bakteriale, subtilisina, rezulton në dy fragmente: njëri është një fragment i madh dhe tjetri është një fragment i vogël. Fragmenti Klenow është fragmenti i madh i cili është 68 kDa në madhësi. Fragmenti i Klenow ka aktivitete 5'→3' polimerazë dhe 3'→5' ekzonukleazë (korrektuese) të ADN Pol I. Aktiviteti 3'→5' i ekzonukleazës i fragmentit Klenow lehtëson heqjen e bazave të shtuara gabimisht ndërsa polimerizimi përparon. Fragmenti Klenow nuk përmban aktivitet 5'→3' ekzonukleazë, i cili tregohet nga E me gjatësi të plotë ose të paprekur.coli ADN polimeraza 1. Është e dobishme kur nevojitet vetëm aktiviteti i polimerizimit. Fragmentet e Klenow-it përdoren për të mbushur 5' mbivargjet, sintezën e sondave, renditjen e ADN-së, sintezën e ADN-së me dy fije, sintezën e vargut të dytë të cDNA dhe mutagjenezën e drejtuar nga vendi.
Figura 01: Fragmenti Klenow
Në aplikime të caktuara, aktiviteti i ekzonukleazës 3'→5' i fragmentit Klenow bëhet gjithashtu i padëshirueshëm. Mund të hiqet duke futur një mutacion në gjenin që kodon fragmentin Klenow. Fragmenti i Klenow-it që rezulton njihet si fragmenti ekzo-Klenow. Prandaj, fragmenti exo-Klenow ka vetëm aktivitetin e polimerazës 5'→3' të E. coli polimerazës 1.
Çfarë është T4 ADN Polimeraza?
T4 ADN polimeraza është një ADN polimerazë që katalizon sintezën e ADN-së. Është një proteinë e koduar nga Bakteriofagu T4. Strukturisht, T4 ADN polimeraza është një proteinë e mbetur prej 898 aminoacide (pesha molekulare prej 103.6 kDa). Kërkon një shabllon dhe një abetare për të katalizuar sintezën.
Figura 02: T4 ADN Polimeraza
Ngjashëm me fragmentin Klenow, T4 ADN polimeraza ka aktivitete 5'→3' polimerazë dhe 3'→5' ekzonukleazë. Për më tepër, i mungon edhe aktiviteti i ekzonukleazës 5'→3'. Polimeraza e ADN-së T4 është e dobishme në mbushjen e skajeve 5'-të spikatura të fragmenteve të ADN-së. Gjithashtu përdoret shpesh për etiketimin me fund 5' ose 3' të ADN-së me dy fije. T4 ADN polimeraza përdoret shpesh në klonimin e hapur. Aktiviteti 3'→5' ekzonukleazë (korrektues) i polimerazës T4 të ADN-së është më i fortë (më shumë se 200 herë) se fragmenti Klenow. Më e rëndësishmja, T4 ADN polimeraza ka procesivitet të lartë (400 nukleotide në sekondë).
Cilat janë ngjashmëritë midis Klenow dhe T4 ADN Polimerazës?
- Klenow dhe T4 ADN polimeraza janë dy polimeraza prokariote.
- Të dyja polimerazat kanë aktivitet 5'→3' polimerazë dhe 3'→5' ekzonukleazë.
- Ato nuk shfaqin aktivitet 5'→3' ekzonukleazë.
- Të dyja enzimat kërkojnë një shabllon dhe një abetare për të katalizuar sintezën e ADN-së.
- Këto enzima mund të çaktivizohen nga nxehtësia në 75 0
Cili është ndryshimi midis Klenow dhe T4 ADN Polimerazës?
Dallimi kryesor midis Klenow dhe T4 ADN polimerazës është origjina e secilës enzimë. Fragmenti Klenow e ka origjinën nga një bakter ndërsa T4 ADN polimeraza e ka origjinën nga një bakterofag i cili është një virus. T4 ADN polimeraza ka një procesivitet të lartë se fragmenti Klenow. Për më tepër, T4 ADN polimeraza ka një aktivitet të fortë korrigjues sesa fragmenti Klenow. Kështu, ky është një tjetër ndryshim midis polimerazës së ADN-së Klenow dhe T4.
Info-grafika e mëposhtme liston më shumë ndryshime midis Klenow dhe T4 ADN polimerazës në formë tabelare.
Përmbledhje – Klenow vs T4 ADN Polimeraza
Fragmenti Klenow është një fragment i madh i E. coli ADN-polimerazës 1. Ai ka vetëm aktivitete 5'→3' polimerazë dhe 3'→5' ekzonukleazë. I mungon aktiviteti i ekzonukleazës 5'→3' të ADN-së së paprekur të E. coli pol 1. Prandaj, fragmenti Klenow është një polimerazë bakteriale. Nga ana tjetër, T4 ADN polimeraza është një polimerazë e koduar nga bakteriofagu T4. Ngjashëm me fragmentin Klenow, ai përmban aktivitete 5'→3' polimerazë dhe 3'→5' ekzonukleazë, dhe i mungon aktiviteti 5'→3' ekzonukleazë. Megjithatë, T4 ADN polimeraza ka procesivitet të lartë dhe aktivitet të lartë korrigjues sesa fragmenti Klenow. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis Klenow dhe T4 ADN polimerazës.
