Dallimi kryesor midis ultracentrifugimit të gradientit të saharozës dhe ultracentrifugimit me jastëk saharozë është se në ultracentrifugimin me gradient saharozë, përdoret një gradient i vazhdueshëm i saharozës, ndërsa në ultracentrifugimin me jastëk saharozë, përdoret një gradient i ndërprerë i saharozës.
Gradienti i saharozës dhe ultracentrifugimi me jastëk saharozë janë dy lloje të ngjashme teknikash që përdoren për të ndarë lloje specifike të makromolekulave. Në të dyja teknikat, përdoret një gradient i densitetit të saharozës. Por në ultracentrifugimin e gradientit të saharozës, përdoret një gradient i vazhdueshëm i densitetit ndërsa, në ultracentrifugimin me jastëk saharozë, përdoret një gradient densiteti i ndërprerë.
Çfarë është ultracentrifugimi me gradient saharozë?
Ultracentrifugimi i gradientit të saharozës është një teknikë që mund të përdoret për të fraksionuar makromolekulat si ADN, ARN dhe proteina. Ka disa hapa në këtë teknikë. Ato janë përgatitja e gradientit të saharozës, centrifugimi, ndarja dhe elucioni. Përgatitja e gradientit është hapi kryesor në këtë teknikë. Në këtë teknikë, kampioni që përmban makromolekula me madhësi të ndryshme shtrohet në sipërfaqen e një kolone gradienti saharozë. Gjatë centrifugimit, makromolekulat me madhësi të ndryshme sedimentojnë nëpër kolonën e gradientit të saharozës me shpejtësi të ndryshme. Sedimentimi varet nga disa faktorë, duke përfshirë forcën e centrifugimit, formën e madhësisë dhe densitetin e makromolekulave, dendësinë dhe viskozitetin e gradientit. Në fund të centrifugimit, makromolekulat ndahen në hapësirë sipas densitetit. Makromolekulat më të mëdha (makromolekulat me densitet të lartë) sedimentohen drejt fundit. Ato më të lehta (makromolekulat me densitet të ulët) mbeten në krye të gradientit. Prandaj, molekulat ndahen si breza të ndryshëm. Pastaj brezat duhet të ndahen dhe duhet të bëhet pastrimi i makromolekulës specifike nga saharoza.
Figura 01: Ultracentrifugimi me gradient saharozë
Në anën e aplikimit, kjo metodë përdoret gjerësisht për fraksionimin e molekulave të ADN-së. Ultracentrifugimi i gradientit të saharozës përdoret zakonisht për të karakterizuar madhësinë dhe përbërjen e kompleksit të proteinave. Për më tepër, kjo teknikë përdoret për pastrimin e pjesshëm të mRNA.
Çfarë është ultracentrifugimi me jastëk me sukrozë?
Utracentrifugimi me jastëk saharozë është një tjetër teknikë që mundëson fraksionimin e makromolekulave. Ndryshe nga ultracentrifugimi i gradientit të densitetit të saharozës, ultracentrifugimi me jastëk të saharozës përdor një gradient të densitetit të ndërprerë. Përqendrimi i saharozës rritet nga lart poshtë në hapa të veçantë. Në këtë teknikë, ndarja arrihet duke vendosur ekstraktin e kthjelluar mbi një vëllim të vogël të tretësirës së saharozës në një tub centrifuge, i ashtuquajturi jastëk saharozë. Kjo lejon ndarje më të mirë në centrifugimin me shpejtësi të lartë. Kur molekulat ndahen si një brez midis jastëkut të saharozës, brezi i bardhë mund të mblidhet dhe pastrohet. Për më tepër, papastërtitë mund të hiqen më tej duke përdorur metodën e jastëkut të saharozës. Metoda e jastëkut të saharozës lejon që 60-70% e tubit të mbushet me kampion. Prandaj, metoda e jastëkut të saharozës mundëson përpunimin e një vëllimi më të madh të mostrës.
Cilat janë ngjashmëritë midis ultracentrifugimit të gradientit të saharozës dhe jastëkut të sukrozës?
- gradienti i saharozës dhe ultracentrifugimi me jastëk saharozë janë dy teknika që përdoren për të ndarë një përzierje makromolekulash.
- Në të dyja metodat, përdoret një gradient saharozë.
- Centrifugimi është një hap në të dyja metodat.
- Molekulat sedimentohen si brez ose zonë në secilën metodë.
Cili është ndryshimi midis ultracentrifugimit të gradientit të saharozës dhe jastëkut të sukrozës?
Ultracentrifugimi i gradientit të saharozës është një teknikë që përdor një gradient të vazhdueshëm saharozë në tubin e centrifugës ndërsa ultracentrifugimi me jastëk saharozë është një teknikë që përdor një gradient saharozë të ndërprerë. Kështu, ky është ndryshimi kryesor midis gradientit të saharozës dhe ultracentrifugimit me jastëk saharozë.
Për më tepër, ultracentrifugimi me jastëk saharozë lejon përpunimin e një vëllimi më të madh të kampionit ndërsa ultracentrifugimi me gradient saharozë lejon që të përpunohet një vëllim relativisht i ulët i kampionit.
Më poshtë infografik tregon më shumë ndryshime midis ultracentrifugimit të gradientit të saharozës dhe jastëkut të saharozës.
Përmbledhje – Gradienti i saharozës kundrejt ultracentrifugimit me jastëk saharozë
Ultracentrifugimi i gradientit të saharozës ndan makromolekulat duke përdorur një gradient të vazhdueshëm saharozë. Në të kundërt, ultracentrifugimi i jastëkut të saharozës përdor një gradient të pandërprerë të saharozës për të ndarë llojin specifik të grimcave në një përzierje. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis gradientit të saharozës dhe ultracentrifugimit të jastëkut të saharozës. Metoda e jastëkut të saharozës lejon mbledhjen e grimcave të paprekura morfologjikisht pasi nuk shkakton stres mekanik, ndryshe nga ultracentrifugimi i gradientit të saharozës, i cili shtyp molekulat në fund të tubit. Për më tepër, ultracentrifugimi i jastëkut të saharozës lejon që të përpunohet një vëllim më i madh i kampionit sesa ultracentrifugimi i gradientit të saharozës.
