Dallimi kryesor midis FISH dhe CGH është se FISH është një teknikë molekulare që zbulon sekuencë specifike të ADN-së në një kromozom duke përdorur sonda të etiketuara në mënyrë fluoreshente, ndërsa CGH është një teknikë tjetër citogjenetike molekulare që zbulon ndryshime në ADN-në gjenomike.
Analiza citogjenetike luan një rol të rëndësishëm në mjekësi kur zbulohen anomalitë kromozomale si aneuploiditë, fshirjet, dyfishimet dhe rirregullimet, etj. Anomalitë kromozomike përfundimisht çojnë në sëmundje gjenetike si kanceri, infertiliteti, sindroma Down, sindroma Klinefelter, sindroma Klinefelter, sindromi, leucemia etj. Ekzistojnë metoda të ndryshme molekulare citogjenetike për zbulimin e defekteve dhe sëmundjeve të lartpërmendura. Midis tyre, FISH (hibridizimi fluoreshent in situ) dhe CGH (hibridizimi gjenomik krahasues) janë dy teknika të fuqishme hibridizimi. Megjithatë, të dyja metodat kanë të mirat dhe të këqijat.
Çfarë është FISH?
FISH është një teknikë e hibridizimit të acidit nukleik që kryhet në një pjesë ose pjesë të indit, në të gjithë indin ose qelizat. Është një metodë e bazuar në sonda. Teknika varet nga teoria e çiftimit të bazave plotësuese të Watson Crick, duke rezultuar në hibride ADN-ADN ose hibride ADN-ARN, të cilat mund të zbulojnë gjenet e mutuara ose mund të identifikojnë gjenin me interes. Më tej, kjo teknikë përdor sekuencat e ADN-së me një zinxhir, sekuencat e ADN-së me dy zinxhirë, sekuencat e ARN-së me një zinxhir ose oligonukleotidet sintetike të përgatitura duke përdorur përkthimin e nofkës si sonda që janë plotësuese me sekuencat e gjeneve me interes. Veç kësaj, veçoria më e rëndësishme e kësaj teknike është etiketimi i sondave me ngjyra fluoreshence. Kështu, sondat lidhen me pjesët plotësuese të kromozomit dhe e bëjnë të lehtë zbulimin.
Për më tepër, FISH është një metodë shumë e ndjeshme dhe specifike. Prandaj, është një teknikë e zakonshme si në kërkimin ashtu edhe në diagnostikimin e tumoreve malinje hematologjike dhe tumoreve të ngurta. Por, FISH tregon rezolucion të ulët. Gjithashtu kërkon njohuri paraprake të anomalitetit të objektivit për të hartuar sekuencat e sondës.
Figura 01: PESHK
Ka shumë aplikime të FISH, kryesisht në diagnostikimin molekular të sëmundjeve infektive për të identifikuar praninë e patogjenëve dhe për të konfirmuar patogjenin nëpërmjet diagnostikimit molekular. Për më tepër, FISH është një teknikë e përdorur zakonisht në fushat e biologjisë së zhvillimit, kariotipizimit dhe analizës filogjenetike dhe hartës fizike të kromozomeve.
Çfarë është CGH?
Hibridizimi gjenomik krahasues (CGH) është një tjetër teknikë citogjenetike molekulare e bazuar në ADN që mund të zbulojë ndryshimet e sekuencave gjenomike të ADN-së. Metoda është një metodë e avancuar e cila mund të analizojë modifikimet e kromozomeve dhe gjeneve për të zbuluar ndryshimet ose ndryshimet në sekuencat e ADN-së gjenomike. Më tej, CGH kërkon izolimin dhe fragmentimin e ADN-së nga kampioni eksperimental dhe kampioni i referencës. Më pas, mostrat duhet të etiketohen duke përdorur dy ngjyra të ndryshme fluoreshente (zakonisht të kuqe dhe jeshile). Më vonë, të dy mostrat përzihen dhe lejohen për hibridizim konkurrues. Hapi i fundit është analiza e mostrave për ndryshime në ADN, si p.sh. dyfishimi i gjeneve, humbja e gjeneve, etj. Veçanërisht, ajo mat diferencat e numrit të kopjeve të ADN-së midis mostrës së testuar dhe kampionit të kontrollit.
Figura 02: CGH
Një version tjetër i CGH është i disponueshëm tani; është një metodë më e avancuar se CGH normale. Është një teknikë e quajtur CGH e bazuar në grup ose aCGH. aCGH lejon identifikimin e saktë të fshirjeve të gjeneve ose sekuencave në shumë mijëra sekuenca në një eksperiment të vetëm.
Cilat janë ngjashmëritë midis FISH dhe CGH?
- FISH dhe CGH janë dy teknika molekulare.
- Si FISH dhe CGH mbështeten në hibridizimin e acidit nukleik.
- Gjithashtu, të dyja teknikat kanë nevojë për sonda të dizajnuara për të zbuluar objektiva specifike të ADN-së.
- Ne i përdorim ato për diagnostikimin para dhe pas lindjes të sëmundjeve gjenetike.
- Për më tepër, si FISH ashtu edhe CGH janë mjete shumë të fuqishme për të studiuar ndryshimet gjenomike.
- Ata përdorin ngjyra fluoreshente për të etiketuar sondat.
Cili është ndryshimi midis FISH dhe CGH?
FISH është një procedurë hibridizimi in situ që përdor sonda fluoreshente për të zbuluar sekuenca specifike të ADN-së, ndërsa CGH është një teknikë hibridizimi molekular që zbulon ndryshimet e sekuencave gjenomike të ADN-së. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis FISH dhe CGH.
Për më tepër, FISH kërkon njohuri paraprake për anomalitë e objektivit për të hartuar sekuencat e sondës, ndërsa CGH nuk kërkon njohuri paraprake. Gjithashtu, një ndryshim i mëtejshëm midis FISH dhe CGH është se FISH tregon rezolucion të kufizuar ndërsa aCGH tregon rezolucion të lartë.
Infografia e mëposhtme përmbledh ndryshimin midis FISH dhe CGH.
Përmbledhje – FISH vs CGH
FISH dhe CGH janë dy teknika molekulare citogjenetike që lehtësojnë zbulimin e sekuencave të gjeneve me interes. FISH lehtëson zbulimin e sekuencës specifike të ADN-së në një kromozom duke përdorur sonda të etiketuara me fluoreshente ndërsa CGH lehtëson zbulimin e ndryshimeve në ADN gjenomike. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis FISH dhe CGH.
