Dallimi kryesor midis sondave radioaktive dhe joradioaktive është se sondat radioaktive janë sekuenca të ADN-së ose ARN-së me një fije floku që janë etiketuar me izotope radioaktive ndërsa sondat joradioaktive janë sekuenca të ADN-së ose ARN-së me një fije floku që janë etiketuar me një etiketë kimike ose një etiketë fluoreshente.
Hibridizimi i acidit nukleik është një teknikë e rëndësishme në biologjinë molekulare, veçanërisht në diagnozën mikrobike. Ndihmon për të identifikuar ose zbuluar një sekuencë të veçantë të acidit nukleik. Në këtë teknikë, acidet nukleike fiksohen në një sipërfaqe të fortë dhe hibridizohen me një sondë. Një sondë është një fragment i ADN-së ose ARN-së që është plotësues i një sekuence me interes. Nëse sekuenca e synuar është e pranishme në kampion, sonda do të hibridizohet me të dhe do ta bëjë atë të dallueshme. Ekzistojnë dy lloje sondash si sonda radioaktive dhe jo radioaktive. Prandaj, ne mund t'i etiketojmë sondat me një etiketë radioaktive ose një etiketë fluoreshente.
Çfarë janë sondat radioaktive?
Sondat radioaktive janë fragmente të ADN-së ose ARN-së me një zinxhir me një etiketë radioaktive. Radioizotopet përdoren në përgatitjen e sondave radioaktive. Radioizotopet 32P, 33P dhe 35S përdoren zakonisht në etiketimin e sondave. Për më tepër, radioizotopet 3H dhe 1251 përdoren gjithashtu në një masë më të vogël në etiketimin e sondave. Por ato përdoren për aplikime specifike. Midis radioizotopeve të ndryshëm, 32P është izotopi më i përdorur në etiketimin e sondave radioaktive.
Sondat radioaktive ofrojnë një shkallë më të lartë besueshmërie dhe specifike. Prandaj, ato ofrojnë ndjeshmëri maksimale dhe lejojnë kuantifikimin e saktë të sekuencave të synuara. Megjithatë, ka disa disavantazhe që lidhen me sondat radioaktive. Ata kanë gjysmë jetë të shkurtër. Për më tepër, ato janë të rrezikshme dhe prodhimi, përdorimi dhe asgjësimi janë problematike gjatë trajtimit. Përveç kësaj, përgatitja e sondës radioaktive është një proces i kushtueshëm. Prandaj, për shkak të çështjeve të sigurisë dhe kostos, sondat radioaktive nuk përdoren si sonda jo radioaktive në ditët e sotme.
Çfarë janë sondat joradioaktive?
Sondat joradioaktive janë lloji i dytë i sondave që janë etiketuar kimikisht. Digoksigjenina është një sondë jo radioaktive, e cila është një shënues i bazuar në antitrupa. Sondat e digoksigjeninës janë specifike dhe të ndjeshme. Biotina është një tjetër etiketë e përdorur në përgatitjen e sondës joradioaktive. Sistemet e zbulimit të biotinës/streptavidinës dhe digoksigjeninës/antitrupave janë sondat joradioaktive më të përdorura në hibridizim. Për më tepër, sistemi i peroksidazës së rrikës është një tjetër sistem hetimor joradioaktiv. Pasi këto sonda joradioaktive hibridizohen me sekuencat e synuara, ato mund të zbulohen nëpërmjet autoradiografisë ose teknikave të tjera imazherike.
Figura 01: Hibridizimi me sonda joradioaktive
Sondat joradioaktive përdoren më shpesh në hibridizimin e acidit nukleik sesa sondat radioaktive. Kjo është për shkak se sondat joradioaktive nuk shoqërohen me materiale të rrezikshme. Për më tepër, metodat e zbulimit joradioaktiv kërkojnë kohë më të shkurtra ekspozimi për të zbuluar sinjalin e hibridizimit. Megjithatë, hapat e përfshirë në hibridizimin e ADN-së me sondat joradioaktive zakonisht janë të lodhshme dhe kërkojnë kohë. Për më tepër, zgjidhjet e disponueshme komerciale janë të shtrenjta.
Cilat janë ngjashmëritë midis sondave radioaktive dhe joradioaktive?
- Sondat radioaktive dhe joradioaktive janë dy lloje sondash të përdorura në hibridizimin e acidit nukleik.
- Ato lehtësojnë zbulimin e sekuencave të synuara në kampion.
- Të dy llojet e sondave janë po aq të ndjeshme dhe specifike.
Cili është ndryshimi midis sondave radioaktive dhe joradioaktive?
Sondat radioaktive janë sekuencat e ADN-së ose ARN-së me një zinxhir të etiketuar me izotope radioaktive, ndërsa sondat joradioaktive janë sekuencat e ADN-së ose ARN-së me një zinxhir të etiketuar me një etiketë kimike. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis sondave radioaktive dhe jo radioaktive. Gjithashtu, izotopet radioaktive janë të rrezikshme. Prandaj, sondat radioaktive janë mjaft të rrezikshme, ndërsa sondat joradioaktive nuk janë të rrezikshme.
Për më tepër, një tjetër ndryshim midis sondave radioaktive dhe joradioaktive janë disavantazhet e tyre. Gjysma e shkurtër e jetës dhe rreziqet që lidhen me prodhimin, përdorimin dhe asgjësimin e tyre janë disavantazhet e përdorimit të sondave radioaktive. Nga ana tjetër, hapat e përfshirë në hibridizimin e ADN-së me sondat joradioaktive janë zakonisht të lodhshme dhe kërkojnë kohë.
Më poshtë infografik tregon më shumë krahasime në lidhje me ndryshimin midis sondave radioaktive dhe joradioaktive.
Përmbledhje – Sonda radioaktive kundrejt sondave joradioaktive
Një sonda është një fragment i ADN-së ose ARN-së që përmban një sekuencë nukleotide që është plotësuese me sekuencën e interesit. Për të zbuluar sekuencën e synuar, sondat mund të etiketohen në mënyrë radioaktive, fluoreshente ose kimikisht. Sondat lidhen me sekuenca plotësuese në kampion. Sondat radioaktive janë etiketuar me izotope radioaktive ndërsa sondat joradioaktive janë etiketuar me biotinë, digoksigjeninë ose peroksidazë rrikë. Kështu, ky është ndryshimi kryesor midis sondave radioaktive dhe joradioaktive.
