Dallimi kryesor midis kromatografisë së afinitetit dhe shkëmbimit jonik është se ne mund të përdorim kromatografinë e afinitetit për të ndarë përbërësit e ngarkuar ose të pangarkuar në një përzierje, ndërsa ne mund të përdorim kromatografinë e shkëmbimit jon për të ndarë përbërësit e ngarkuar në një përzierje.
Kromatografia është një teknikë që mund ta përdorim për të ndarë përbërësit e dëshiruar në një përzierje. Ekzistojnë lloje të ndryshme si kromatografia e lëngët, kromatografia me gaz, etj. Kromatografia e afinitetit dhe kromatografia e shkëmbimit të joneve janë dy nënkategori të kromatografisë së lëngshme. Gjithashtu, në këto teknika, ekzistojnë dy faza. Përkatësisht, ato janë faza stacionare dhe faza e lëvizshme. Qëllimi i këtyre teknikave është ndarja e komponentëve, në varësi të lidhjes së komponentëve, në fazën e lëvizshme në sipërfaqen e fazës stacionare.
Çfarë është kromatografia e afinitetit?
Kromatografia e afinitetit është një teknikë biokimike që ne përdorim për të ndarë përbërësit në një përzierje në varësi të ndërveprimeve midis këtyre komponentëve.
Ndërveprimet që përdorim në këtë rast përfshijnë sa vijon:
- Ndërveprimet antigjen-antitrup
- Ndërveprimet enzimë-substrat
- Ndërveprimet receptor-ligand
- Ndërveprimet protein-acid nukleik
Në këtë teknikë, ne përdorim vetitë molekulare të molekulave për këtë teknikë të ndarjes. Këtu, ne lejojmë përbërjen e dëshiruar të ndërveprojë me një fazë stacionare nëpërmjet lidhjes hidrogjenore, ndërveprimit jonik, urave disulfide, ndërveprimit hidrofobik, etj. Molekulat që nuk ndërveprojnë me fazën stacionare do të eluten së pari. Kështu mund ta ndajmë nga përzierja. Përbërja e dëshiruar do të mbetet e lidhur me fazën e palëvizshme. Prandaj, ne mund ta shkëputim atë duke përdorur një tretës elutës dhe ta bëjmë të elurtojë për ta ndarë gjithashtu.
Figura 01: Një kolonë kromatografike
Kromatografia e afinitetit është e dobishme në pastrimin dhe përqendrimin e një substance nga një përzierje duke përdorur një zgjidhje tampon. Gjithashtu, është e dobishme në reduktimin e substancave të padëshiruara në një përzierje. Kur marrim parasysh aparatin që përdorim për këtë proces, duhet të përdorim një kolonë të mbushur me fazën tonë të palëvizshme. Më pas, duhet të ngarkojmë fazën e lëvizshme e cila përmban biomolekulat që do të ndajmë. Më pas, lërini të lidhen me fazën e palëvizshme. Më pas, duke përdorur një tampon larës, ne mund të ndajmë biomolekulat që nuk synojnë, por molekulat e synuara duhet të kenë një afinitet të lartë për fazën e palëvizshme në mënyrë që të kenë sukses procesin e ndarjes.
Çfarë është kromatografia e shkëmbimit jonesh?
Kromatografia jonike është një formë e kromatografisë së lëngët në të cilën mund të analizojmë substancat jonike. Shpesh, ne e përdorim atë për të analizuar anionet dhe kationet inorganike (d.m.th. anionet e klorurit dhe nitrateve dhe kationet e kaliumit, natriumit). Megjithëse është më pak e zakonshme, ne mund të analizojmë edhe jonet organike. Për më tepër, ne mund ta përdorim këtë teknikë për pastrimin e proteinave sepse proteinat janë molekula të ngarkuara në vlera të caktuara pH. Këtu, ne përdorim një fazë të ngurtë të palëvizshme në të cilën grimcat e ngarkuara mund të ngjiten. Për shembull, ne mund të përdorim kopolimerët e rrëshirës polistiren-divinilbenzen si mbështetje të ngurtë.
Figura 02: Fazat e kromatografisë së shkëmbimit të joneve
Për të shpjeguar më tej këtë, faza stacionare ka jone të fiksuar siç janë anionet sulfate ose kationet aminare kuaternare. Secila prej këtyre duhet të shoqërohet me një kundërjon (një jon me ngarkesë të kundërt), nëse duam të ruajmë neutralitetin e këtij sistemi. Këtu, nëse kundërjoni është një kation, atëherë ne e emërtojmë sistemin si një rrëshirë shkëmbyese kationesh. Por, nëse kundërjoni është një anion, sistemi është një rrëshirë e shkëmbimit të anionit.
Ka pesë faza kryesore në një proces shkëmbimi jonesh;
- Faza fillestare
- Adsorbimi i objektivit
- Fillimi i elucionit
- Fundi i elucionit
- Rigjenerim
Cili është ndryshimi midis afinitetit dhe kromatografisë së shkëmbimit të joneve?
Kromatografia e afinitetit është një teknikë biokimike që ne përdorim për të ndarë përbërësit në një përzierje në varësi të ndërveprimeve midis këtyre përbërësve ndërsa kromatografia jonike është një formë e kromatografisë së lëngshme në të cilën mund të analizojmë substancat jonike. Prandaj, ndryshimi kryesor midis kromatografisë së afinitetit dhe shkëmbimit të joneve është se ne mund të përdorim kromatografinë e shkëmbimit të joneve vetëm për ndarjen e substancave jonike ndërsa kromatografia e afinitetit është në gjendje të ndajë grimcat e ngarkuara dhe të pangarkuara. Kur merret parasysh parimi i punës, ndryshimi midis kromatografisë së afinitetit dhe shkëmbimit të joneve është se kromatografia e afinitetit vazhdon për shkak të faktit se molekulat e synuara kanë një afinitet të lartë për fazën stacionare. Megjithatë, për kromatografinë e shkëmbimit të joneve, molekulat e synuara kanë një ngarkesë të kundërt me atë të sipërfaqes së fazës stacionare.
Infografia e mëposhtme paraqet ndryshimin midis afinitetit dhe kromatografisë së shkëmbimit jonik si një krahasim krah për krah.
Përmbledhje – Afiniteti kundrejt Kromatografisë së Shkëmbimit të Jonit
Në përmbledhje, kromatografia e afinitetit dhe e shkëmbimit të joneve janë dy forma të teknikave kromatografike të lëngshme. Dallimi kryesor midis kromatografisë së afinitetit dhe shkëmbimit jon është se ne mund të përdorim kromatografinë e afinitetit për të ndarë përbërësit e ngarkuar ose të pa ngarkuar në një përzierje, ndërsa ne mund të përdorim kromatografinë e shkëmbimit jon për të ndarë përbërësit e ngarkuar në një përzierje.
