Dallimi kryesor midis filtrimit të xhelit dhe kromatografisë së afinitetit është se kromatografia e filtrimit me xhel varet nga ndryshimet në peshën molekulare ose madhësinë e kampionit të analizuar, ndërsa kromatografia e afinitetit varet nga afiniteti i një analiti ndaj një ligandi të imobilizuar..
Termi kromatografi në kiminë analitike i referohet procesit të ndarjes së përbërësve në një përzierje duke përdorur teknika të ndryshme. Kromatografia është një emër kolektiv që përfaqëson një numër të ndryshëm metodash të ndryshme për ndarje.
Çfarë është kromatografia e filtrimit me xhel?
Kromatografia e filtrimit me xhel është një teknikë analitike në të cilën ndarja e komponentëve varet nga ndryshimi në peshën ose madhësinë molekulare. Kjo teknikë njihet edhe si kromatografia me përjashtim të madhësisë ose kromatografia me sitë molekulare. Teknika e ndarjes në këtë proces varet nga aftësia e ndryshme e molekulave në kampion për të hyrë në poret e mediumit të filtrimit me xhel.
Në teknikën e filtrimit me xhel, faza e palëvizshme përmban rruaza të materialit të hidratuar, të ngjashëm me sfungjer, me pore me dimensione molekulare që përmbajnë një gamë të ngushtë madhësish. Nëse kalojmë një tretësirë ujore të përbërë nga molekula të madhësive të ndryshme përmes një kolone që përmban këto "sita molekulare", molekulat që janë më të mëdha se poret e mediumit të filtrimit lëvizin shpejt nëpër kolonë. Në të kundërt, molekulat më të vogla hyjnë në poret e xhelit dhe tentojnë të lëvizin ngadalë nëpër kolonë. Molekulat elustrojnë nga kolona sipas rendit të zvogëlimit të madhësisë molekulare. Këtu, kufiri i përjashtimit të xhelit është masa molekulare e molekulave më të vogla të paaftë për të depërtuar në poret e një xheli të caktuar.
Ekzistojnë lloje të ndryshme të teknikave të filtrimit me xhel, të tilla si metoda indirekte e filtrimit me xhel, filtrimi me xhel në gjendje të qëndrueshme, dializa me rruaza xhel, etj. Kromatografia indirekte e filtrimit me xhel është e dobishme në përcaktimin e hormoneve të lira të tiroides. Kromatografia e filtrimit me xhel në gjendje të qëndrueshme është një teknikë indirekte e dobishme më së shumti për matjen e steroideve të lira si kortizoli, testosteroni, etj. Dializa me rruaza xhel, nga ana tjetër, është një modifikim i filtrimit me xhel në gjendje të qëndrueshme që është relativisht më i thjeshtë.
Çfarë është kromatografia e afinitetit?
Kromatografia e afinitetit është një teknikë analitike dhe një metodë ndarjeje që varet nga një ndërveprim specifik lidhës midis një ligandi të imobilizuar dhe partnerit të tij lidhës. Disa shembuj përfshijnë lidhjen antitrup-antigjen, lidhjen enzimë-substrat dhe lidhjen enzimë-frenues. Prandaj, kjo teknikë ka shumë aplikime të rëndësishme në pastrimin e acidit nukleik, pastrimin e proteinave nga ekstraktet e qelizave dhe pastrimin nga gjaku.
Në këtë teknikë, vetia më e rëndësishme është imobilizimi i ligandit. Për këtë mund të përdorim materiale të ndryshme si akrilatet dhe xhel silicë. Është e rëndësishme për të parandaluar ndërhyrjen sterike të molekulës së synuar në ligand. Për më tepër, një frenues është ngjitur në fazën e ngurtë. Ne e quajmë këtë frenues një ndarës. Klasikisht, një ndarës përbëhet nga një zinxhir hidrokarburesh.
Faza stacionare e kromatografisë së afinitetit përmban bërthamën, ndarësin dhe ligandin. Ndonjëherë, ai gjithashtu ka një jon metalik që është i lidhur me ligand. Faza e ngurtë më e preferuar për fazën e palëvizshme në këtë teknikë është xheli i agarozës, sepse shpërndahet lehtësisht për të mbushur dhe paketuar kolonën me shtretër rrëshirë të çdo madhësie, dhe është mjaft i madh që biomolekulat të rrjedhin lirshëm brenda dhe nëpër rruaza. Ligandët mund të lidhen në mënyrë kovalente me polimerin e rruazës në mënyra të ndryshme. Komponimet më të zakonshme ndarëse janë bromidi cianogjen, epooksidi, epoksidi me acid C6 dhe diamina. Nga ana tjetër, ligandi që mund të përdorim ndryshon sipas objektivit, p.sh., antitrupa-antigjen, jone hekuri ose alumini-fosfoproteina, avidin-biotin, glutation-GST, proteinat e etiketuara me kelator, etj.
Cili është ndryshimi midis filtrimit të xhelit dhe kromatografisë së afinitetit?
Kromatografia është një teknikë e rëndësishme analitike. Kromatografia e filtrimit me xhel dhe kromatografia e afinitetit janë dy variacione të rëndësishme të kromatografisë. Dallimi kryesor midis filtrimit të xhelit dhe kromatografisë së afinitetit është se kromatografia e filtrimit të xhelit varet nga ndryshimet në peshën molekulare ose madhësinë e kampionit të analitit, ndërsa kromatografia e afinitetit varet nga afiniteti i një analiti ndaj një ligandi të imobilizuar.
Përmbledhje – Filtrimi xhel kundrejt kromatografisë afiniteti
Ka lloje të ndryshme teknikash kromatografike sipas aplikimit të tyre dhe natyrës së kampionit të analitit. Filtrimi me xhel dhe kromatografia e afinitetit janë dy lloje të tilla teknikash. Dallimi kryesor midis filtrimit të xhelit dhe kromatografisë së afinitetit është se kromatografia e filtrimit të xhelit varet nga ndryshimet në peshën molekulare ose madhësinë e mostrës së analitit, ndërsa kromatografia e afinitetit varet nga afiniteti i një analiti ndaj një ligandi të imobilizuar.
