Dallimi kryesor – Elektroforeza kapilare vs Elektroforeza me xhel
Elektroforeza është një teknikë që përdoret për të ndarë biomolekulat bazuar në ngarkesën e grimcave, madhësinë e grimcave dhe formën e grimcave. Migrimi i molekulës, i njohur si lëvizshmëria elektroforetike, varet nga lloji i polimerit/xhelit të përdorur, madhësia e poreve të tij, tensioni i ofruar, koha e funksionimit dhe raporti sipërfaqe ndaj vëllimit. Ekzistojnë lloje të ndryshme të teknikave të elektroforezës bazuar në llojin e biomolekulës së përdorur. Lloji i parë i elektroforezës i shpikur ishte elektroforeza e letrës ku një letër nitroceluloze u përdor si medium për ndarjen e biomolekulave. Parimi i elektroforezës së xhelit, ku xhel me madhësi të ndryshme pore përdoreshin për të ndarë biomolekulat, u shpik më vonë. Teknika e elektroforezës me xhel u modifikua më tej për të përmirësuar saktësinë e teknikës, dhe një modifikim i tillë është elektroforeza kapilar. Dallimi kryesor midis elektroforezës kapilar dhe elektroforezës xhel është se elektroforeza me xhel kryhet në një plan vertikal ose horizontal duke përdorur një xhel polimer me madhësi standarde të poreve ndërsa elektroforeza kapilar kryhet në një tub kapilar me një lëng polimer ose një xhel.
Çfarë është Elektroforeza me Xhel?
Elektroforeza me xhel është një teknikë që përdoret për të ndarë kryesisht acidet nukleike, proteinat ose aminoacidet bazuar në ngarkesën, madhësinë dhe formën e saj. Kjo teknikë përdor një xhel fizik, i cili është një substancë polimer, si mjet ndarës. Xhelet më të përdorura janë Agarose (për ndarjen e acidit nukleik) dhe Polyakrilamid (për ndarjen e proteinave). Aparati elektroforetik i xhelit përmban tabakanë e hedhjes së xhelit për përgatitjen e xhelit, krehërat e derdhjes për përgatitjen e puseve, rezervuarin e tamponit, elektrodat - pozitive (anodë) dhe negative (katodë) dhe njësinë e furnizimit të tensionit. Molekulat si ADN ose ARN, të cilat janë të ngarkuara negativisht, lëvizin nga katoda në anodë dhe molekulat që janë të ngarkuara pozitivisht lëvizin anasjelltas. Përgatitja e xhelit bëhet sipas kërkesës. Nëse kërkohet një rezolucion i lartë ose ndarja e molekulave, duhet të përgatitet një xhel me përqendrim të lartë me një madhësi më të vogël pore. Molekulat e ndara në matricën e xhelit vërehen pas një teknike ngjyrosjeje. Molekulat e ndara shfaqen si shirita në matricën e xhelit.
Figura 01: Elektroforeza me xhel
Elektroforeza e xhelit përdoret në diagnostikimin molekular, si p.sh. gjurmët e gishtërinjve të ADN-së, për të përcaktuar praninë e një fragmenti të veçantë ADN/ARN ose një proteine. Elektroforeza me xhel përcakton gjithashtu pastërtinë e mostrës së biomolekulës së nxjerrë. Elektroforeza me xhel kryhet si një hap paraprak për in dhe hibridizimin dhe si një analizë konfirmuese pas sekuencës.
Çfarë është Elektroforeza Kapilare?
Elektroforeza kapilare është një modifikim i elektroforezës së xhelit që përdor të njëjtin parim të ndarjes bazuar në ngarkesën, madhësinë e molekulës, por kryhet në një tub kapilar ose me një substancë xhel ose një polimer të lëngshëm. Kapilarët përgatiten nga silicë e shkrirë dhe çdo tub kapilar ka një diametër të brendshëm prej 50-100μm dhe është 25-100cm në gjatësi. Mostrat injektohen në tubin kapilar që përmban materialin polimer dhe ndahen shumë shpejt sesa elektroforeza konvencionale me xhel. Sistemi kapilar është i mbrojtur mirë brenda një xhakete izoluesi që mbron kampionin nga çdo ndotje. Kapilarët mund të mbushen me polimerë të lëngshëm si hidroksietil celuloza ose xhel me rezolucion të lartë si poliakrilamid. Elektroforeza kapilare siguron rezolucion më të madh; prandaj ndarja është më e saktë. Elektroforeza kapilare përdor një sistem detektor të automatizuar nëpërmjet analizës spektrofotometrike. Kjo është për shkak të raportit më të lartë të sipërfaqes ndaj vëllimit.
Figura 02: Elektroforeza kapilare
Elektroforeza kapilare përdoret në situata të tilla si në mjekësinë ligjore ku kërkohet saktësi më e lartë dhe nuk përdoret zakonisht pasi është teknikë e kushtueshme.
Cilat janë ngjashmëritë midis elektroforezës kapilare dhe elektroforezës me xhel?
- Ndarja e molekulave në të dyja teknikat bazohet në ngarkesën dhe madhësinë e molekulës.
- Të dyja teknikat mund të përdoren për të ndarë si acidet nukleike ashtu edhe proteinat.
- Vëllimi i mostrës së të dyja teknikave është i njëjtë.
- Të dyja teknikat përdorin një tampon për të lehtësuar ndarjen.
Cili është ndryshimi midis elektroforezës kapilare dhe elektroforezës me xhel?
Elektroforeza kapilare vs Elektroforeza me xhel |
|
| Elektroforeza kapilare është një teknikë që ndan biomolekulat në një tub kapilar duke përdorur një mjedis polimer të lëngshëm ose xhel. | Elektroforeza me xhel është një teknikë që ndan biomolekulat në një plan vertikal ose horizontal duke përdorur një medium xhel polimer. |
| Ndarja | |
| Në elektroforezën kapilar, ndarja bëhet brenda një tubi kapilar. | Në elektroforezën me xhel, ndarja bëhet në një plan vertikal ose horizontal. |
| Medium i ndarjes | |
| Polimerët e lëngshëm si hidroksietilceluloza përdoren në elektroforezën kapilare. | Xhelet, ose agarozë ose poliakrilamid, përdoren si një medium në elektroforezën e xhelit. |
| Lidhja e kryqëzuar | |
| Rezolucioni i lartë mund të merret nga elektroforeza kapilare. | Rezolucioni është i ulët në elektroforezë xhel. |
| Raporti i sipërfaqes ndaj vëllimit | |
| Raporti sipërfaqe ndaj vëllimit është i lartë në elektroforezën kapilare. | Raporti sipërfaqe ndaj vëllimit është i ulët në elektroforezë me xhel. |
| Teknika e zbulimit | |
| Zbulimi bëhet nëpërmjet detektorëve të automatizuar spektrofotometrik në elektroforezën kapilare. | Ngjyrosja dhe vëzhgimi nëpërmjet transilluminatorit UV bëhen si teknika zbulimi në elektroforezën e xhelit. |
Përmbledhje – Elektroforeza kapilar vs Elektroforezë me xhel
Diagnostifikimi molekular luan një rol të madh në botën shkencore. Identifikimi dhe pastrimi i ADN-së, ARN-së dhe Proteinave janë hapa kritikë në procedurat diagnostike. Elektroforeza është një teknikë e cila ndan dhe identifikon biomolekulat si në elektroforezën e xhelit ashtu edhe në elektroforezën shumë të avancuar të xhelit kapilar. Elektroforeza me xhel kryhet në një plan vertikal ose horizontal duke përdorur një xhel polimer me madhësi standarde të poreve ndërsa elektroforeza kapilar kryhet në një tub kapilar me një lëng polimer ose një xhel. Ky është ndryshimi midis elektroforezës kapilar dhe elektroforezës xhel. Pas përfundimit të teknikës së elektroforezës, biomolekulat përpunohen më tej për të marrë informacion të nivelit më të lartë nëpërmjet hibridizimit ose përmes teknikave të tilla si marrja e gjurmëve të gishtërinjve.
Shkarko versionin PDF të Elektroforezës Kapilare vs Elektroforezës Xhel
Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimit të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Diferenca midis Elektroforezës Xhel dhe Elektroforezës Kapilare.
