Dallimi kryesor – Elektroforeza e xhelit kundër Faqes SDS
Elektroforeza me xhel është një teknikë që ndan makromolekulat në një fushë elektrike. Është një metodë e zakonshme në biologjinë molekulare për të ndarë ADN-në, ARN-në dhe proteinat nga përzierjet sipas madhësive të tyre molekulare. SDS Page është një lloj elektroforeze xhel që përdoret për të ndarë proteinat nga një përzierje proteinash bazuar në madhësitë e tyre. Elektroforeza e xhelit është një term i përdorur për t'iu referuar teknikës normale të aplikuar për ndarjen e ADN-së, ARN-së dhe proteinave ndërsa SDS Page është një lloj elektroforezë xhel. Ky është ndryshimi kryesor midis elektroforezës së xhelit dhe Faqes SDS.
Çfarë është Elektroforeza me Xhel?
Elektroforeza me xhel është një teknikë e zakonshme që përdoret në laboratorë për të ndarë molekulat e ngarkuara si ADN, ARN, proteina, etj. nga përzierjet e tyre. Një xhel përdoret në elektroforezën e xhelit. Ajo vepron si një sitë molekulare. Ekzistojnë dy lloje të xhelit që përdoren në elektroforezën e xhelit, përkatësisht agaroza dhe poliakrilamide. Përzgjedhja e një preparati xheli dhe xheli janë faktorë të rëndësishëm që duhen marrë parasysh në elektroforezat e xhelit pasi madhësia e poreve të xhelit duhet të manipulohet me kujdes për një ndarje të mirë të molekulave përmes elektroforezës së xhelit. Elektroforeza e xhelit ka një fushë elektrike të lidhur me dy skajet e xhelit. Njëri skaj i xhelit tregon një ngarkesë pozitive ndërsa skaji tjetër është i ngarkuar negativisht.
ADN dhe ARN janë molekula të ngarkuara negativisht. Pasi futen në xhel nga skaji negativ i xhelit dhe aplikohen në fushën elektrike, ato migrojnë nëpër poret e xhelit drejt skajit të xhelit të ngarkuar pozitivisht. Shpejtësia e migrimit varet nga ngarkesa dhe madhësia e molekulës. Molekulat më të vogla migrojnë lehtësisht nëpër poret e xhelit sesa molekulat më të mëdha. Prandaj, molekulat më të vogla udhëtojnë një distancë të gjatë përmes xhelit dhe molekulat më të mëdha udhëtojnë një distancë të shkurtër. Për të vëzhguar lëvizjen e molekulave në xhel, përdoren lloje të veçanta të ngjyrave. Fusha elektrike zbatohet për një periudhë të caktuar kohore dhe ndalet për të parandaluar humbjen e molekulave dhe për të mbajtur molekulat në pozicionet e tyre të udhëtuara. Shirita të ndryshëm mund të vërehen në xhel. Këto breza përfaqësojnë molekula të madhësive të ndryshme. Prandaj, elektroforeza me xhel është e dobishme për të diferencuar molekulat sipas madhësive të tyre.
Elektroforeza e xhelit është e përfshirë në teknika të ndryshme si teknikë përgatitore në biologjinë molekulare si PCR, RFLP, klonimi, sekuenca e ADN-së, blotting jugor, hartëzimi i gjenomit, etj.
Figura 01: Elektroforeza me xhel agarozë
Çfarë është faqja SDS?
Elektroforeza me xhel poliakrilamid dodecil sulfat natriumi (SDS Page) është një lloj elektroforeze xhel që përdoret për të ndarë proteinat. Kur elektroforeza me xhel përdoret për të ndarë proteinat, nevojiten trajtime të veçanta pasi proteinat nuk ngarkohen negativisht si ADN dhe ARN dhe nuk migrojnë drejt fundit pozitiv ose negativ. Prandaj, proteinat denatyrohen dhe mbulohen me një ngarkesë negative përpara elektroforezës me xhel. Bëhet duke përdorur një detergjent të quajtur sodium dodecil sulfate (SDS). Elektroforeza e xhelit që përdor SDS dhe një xhel poliakrilamid për mediumin mbështetës njihet si SDS Page. Kjo teknikë përdoret zakonisht në biokimi, gjenetikë, mjekësi ligjore dhe biologji molekulare.
Gjatë Faqes SDS, proteinat përzihen me SDS. SDS shpalos proteinat në një formë lineare dhe i vesh ato me një ngarkesë negative proporcionale me masën e tyre molekulare. Për shkak të ngarkesës negative, molekulat e proteinave migrojnë drejt fundit të ngarkesës pozitive të xhelit dhe ndahen sipas masës së tyre molekulare. Në SDS Page, poliakrilamidi përdoret si mbështetje solide për xhelin. Ndarja aktuale e proteinave varet kryesisht nga vetitë e xhelit. Prandaj, përgatitja e xhelit të poliakrilamidit duhet të bëhet me kujdes dhe duhet të përdoren përqendrimet e sakta të poliakrilamidit. Xhelet poliakrilamide tregojnë rezolucion të lartë se xhelët e agarozës. Prandaj, SDS Page konsiderohet një teknikë me rezolucion të lartë për ndarjen e proteinave.
Faqja SDS është një lloj elektroforeze me xhel denatyrues. Ka një kufizim të madh në analizën e proteinave. Meqenëse SDS denatyron proteinat përpara ndarjes, nuk lejon zbulimin e aktivitetit enzimatik, ndërveprimet e lidhjes së proteinave, kofaktorët e proteinave, etj.
Figura 02: Faqja SDS
Cili është ndryshimi midis Elektroforezës me Xhel dhe Faqes SDS?
Elektroforeza me xhel vs Faqja e SDS |
|
| Elektroforeza me xhel është një metodë që kryhet për të ndarë makromolekulat duke përdorur një fushë elektrike. | Faqja SDS Page është një teknikë elektroforeze xhel me rezolucion të lartë që përdoret për të ndarë proteinat bazuar në masën e tyre. |
| Gel Run | |
| Mund të kryhet në mënyrë horizontale ose vertikale. | Faqja SDS funksionon gjithmonë vertikalisht. |
| Baza për ndarje | |
| Ndarja ndodh sipas ngarkesës dhe madhësisë. | Ndarja e proteinave ndodh sipas masës dhe ngarkesës. |
| Rezoluta | |
| Elektroforeza me xhel agarozë ka rezolucion të ulët dhe elektroforeza me xhel poliakrilamid ka një rezolucion më të lartë | Faqja SDS ka një rezolucion më të mirë. |
| Denatyrim | |
| Elektroforeza me xhel përfshin teknika denatyruese dhe jo denatyruese. | Faqja SDS denatyron proteinat përpara ndarjes. |
Përmbledhje – Elektroforeza me xhel kundër Faqes SDS
Elektroforeza me xhel është një teknikë e zakonshme që përdoret për ndarjen dhe analizën e ADN-së, ARN-së dhe proteinave bazuar në madhësinë dhe ngarkesën e tyre. Ekzistojnë dy lloje kryesore të elektroforezës së xhelit, përkatësisht elektroforeza me xhel agarozë dhe elektroforeza me xhel poliakrilamid. Xhelet e agarozës përdoren kryesisht për ndarjen e acidit nukleik; kur kërkohet rezolucion më i lartë, përdoren xhel poliakrilamide. SDS Page është një lloj elektroforeze xhel që përdoret zakonisht për të ndarë përzierjet komplekse të proteinave. Konsiderohet si një teknikë e ndarjes së proteinave me rezolucion të lartë. Ky është ndryshimi midis elektroforezës me xhel dhe Faqes SDS.
