Dallimi kryesor – Faqja SDS vs Western Blot
Western blotting është një teknikë që zbulon një proteinë specifike nga një mostër proteine. Kjo teknikë kryhet nëpërmjet disa hapave kyç: elektroforeza me xhel, blotting dhe hibridizimi. Elektroforeza me xhel poliakrilamid dodecil sulfat natriumi (SDS Page) është një lloj teknikë e elektroforezës me xhel që përdoret për të ndarë proteinat sipas madhësive të tyre (peshave molekulare). Western blot është një fletë e veçantë e një membrane blotting e cila përdoret për të transferuar të njëjtin model të proteinave në faqen SDS. Dallimi kryesor midis SDS Page dhe western blot është se SDS Page lejon ndarjen e proteinave në një përzierje ndërsa western blot lejon zbulimin dhe sasinë e një proteine specifike nga një përzierje. Të dyja janë të dobishme në studimet e analizës së proteinave.
Çfarë është faqja SDS?
Faqja SDS është një teknikë elektroforeze xhel që përdoret për ndarjen e proteinave. Përdoret zakonisht në biokimi, gjenetikë, mjekësi ligjore dhe biologji molekulare. Pasi proteinat janë nxjerrë nga kampioni, ato përdoren në një xhel të përbërë nga SDS dhe poliakrilamid. SDS është një detergjent anionik i cili përdoret për të linearizuar proteinat (proteinat e denatyrimit) dhe për t'u dhënë një ngarkesë negative proteinave të linearizuara në përpjesëtim me masën e tyre molekulare. Polyakrilamidi bëhet mbështetës i fortë për xhelin. Proteinat e denatyruara të cilat janë të ngarkuara negativisht migrojnë drejt skajit pozitiv të aparatit përmes xhelit. Sipas madhësive të proteinave, shpejtësitë e migrimit ndryshojnë midis proteinave dhe ndodh ndarja. Prandaj, faqja SDS është e dobishme për ndarjen e proteinave individuale bazuar në madhësitë e tyre.
Përgatitja e xhelit të poliakrilamidit për fraksionimin e proteinave është një hap vendimtar në faqen SDS. Përqendrimi i saktë i poliakrilamidit dhe lloji i agjentit ndërlidhës të përdorur ndikojnë fuqishëm në vetitë fizike të xhelit, gjë që bën ndarjen aktuale të proteinave të ndryshme. Madhësitë e poreve të xhelit duhet të menaxhohen siç duhet për ndarje efektive. Megjithatë, SDS Page konsiderohet si një teknikë e ndarjes së proteinave me rezolucion të lartë.
Teknika e faqes SDS ka një kufizim të madh në analizën e proteinave. Meqenëse SDS denatyron proteinat përpara ndarjes, nuk lejon zbulimin e aktivitetit enzimatik, ndërveprimet e lidhjes së proteinave, kofaktorët e proteinave, etj.
Figura 01: Faqja SDS
Çfarë është Western Blot?
Teknika Western blotting mundëson zbulimin e një proteine specifike nga një përzierje proteinash dhe matjen e sasisë dhe peshës molekulare të proteinës. Western blot është membrana e përdorur gjatë procedurës së blotimit për të marrë imazhin e pasqyrës së modeleve të proteinave në xhelin SDS- poliakrilamid. Membrana e cila përdoret për western blotting përbëhet kryesisht nga nitrocelulozë ose poliviniliden difluorid (PVDF). Membrana me proteinën e transferuar mund të përdoret për të identifikuar proteinën e dëshiruar. Kërkon antitrupa të cilësisë së lartë për zbulimin e proteinës së dëshiruar me hibridizimin. Antitrupi lidhet me antigjenin e tij specifik dhe zbulon praninë e antigjenit të dëshiruar që është një proteinë.
Transferimi i proteinave nga xheli poliakrilamid SDS në western blot kryhet me elektroblotting. Është një metodë efektive dhe e shpejtë që bën që proteinat të elektroforizohen nga xheli dhe të kalojnë në membranën e nitrocelulozës (Western blot).
Figura 02: Western Blot
Cili është ndryshimi midis Faqes SDS dhe Western Blot?
Faqja SDS vs Western Blot |
|
| Faqja SDS është një teknikë elektroforeze me xhel. | Western blot është një teknikë e cila kryhet në një membranë për të zbuluar një proteinë specifike nga një përzierje. |
| Përdor | |
| Faqja SDS lejon ndarjen e proteinave sipas madhësive të tyre. | Western blot lejon transferimin e proteinave në xhelin e faqes SDS pa ndryshuar modelin e tij dhe lejon hibridizimin me antitrupa specifikë. |
| Disavantazhet | |
| Denatyrimi i proteinave, kostoja e lartë dhe prania e kimikateve neurotoksinike janë disavantazhet e kësaj teknike. | Kjo teknikë kërkon kohë dhe kërkon një përvojë të mirë personale dhe kushte specifike të kontrolluara. |
Përmbledhje – Faqja SDS vs Western Blot
Faqja SDS dhe western blot janë dy metoda të përfshira në analizën e proteinave. Faqja SDS lejon ndarjen e lehtë të proteinave në një xhel sipas peshës së tyre molekulare. Western blot ndihmon për të konfirmuar praninë dhe sasinë e një proteine specifike përmes hibridizimit me antitrupa specifikë. Ky është ndryshimi midis faqes SDS dhe western blot.
