Diferenca kryesore – YAC vs Vektori i fagut M13
Klonimi i ADN-së është një proces i rëndësishëm i cili mundëson përhapjen e fragmenteve të rëndësishme të ADN-së të organizmave. Kërkon bashkimin e ADN-së specifike me ADN-në vektoriale për të krijuar ADN-në rekombinante e cila transformohet në organizmin pritës. Një vektor është një molekulë e ADN-së e cila sillet si një mjet për të bartur material gjenetik të huaj në një qelizë ose organizëm tjetër. Ai duhet të jetë i aftë të riprodhohet brenda organizmit pritës dhe të prodhojë kopje të shumta të ADN-së rekombinante. Ekzistojnë lloje të ndryshme vektorësh që përdoren në klonimin e ADN-së. Kromozomi artificial i majave (YAC) dhe vektori i fagut M13 janë dy lloje mes tyre. Dallimi kryesor midis vektorit të fagut YAC dhe M13 është se YAC është një kromozom artificial i cili përsëritet në qelizat e majave ndërsa vektori i fagut M13 është një ADN rrethore e vetme e varur e bakteriofagut M13 që përsëritet në qelizat E Coli.
Çfarë është një vektor YAC?
YAC është një kromozom i ndërtuar artificialisht i cili ka aftësinë të mbartë një segment të madh të ADN-së së huaj dhe të replikohet brenda qelizave të majave. Ai ka centromere, telomerë dhe sekuenca që përsëriten në mënyrë autonome thelbësore për replikimin dhe stabilitetin. YAC duhet të ketë gjithashtu një shënues selektiv ose shënues dhe vende kufizuese për ta bërë atë një vektor efektiv klonimi. Sekuenca të mëdha që variojnë nga 1000 kb deri në 2000 kb mund të futen në YAC dhe të transferohen në maja.
Figura 01: Vektori YAC
Çfarë është vektori i fagut M13?
Bakteriofage M13 është një virus që infekton dhe replikohet në E Coli. Gjenomi i bakteriofagut M13 është i vogël në madhësi, rreth 6.7 kb. Është një ADN me një fije floku, rrethore dhe pozitive. Ky virus infekton në mënyrë specifike bakteret E Coli përmes F pilus. Pasi hyn në ssDNA në bakter, ai sintetizon vargun e tij plotësues dhe bëhet dsDNA ose forma replikuese (RF) e M13. RF mund të sillet si një plazmid brenda organizmit pritës. dsDNA përsëritet brenda E Coli dhe prodhon ssDNA që përmban fagë të rinj. Këta fagë të rinj lirohen vazhdimisht nga E Coli pa e vrarë qelizën pritëse. Megjithatë, infeksioni ngadalëson rritjen e E Coli. dsDNA mund të nxirret nga qelizat bakteriale dhe të përdoret si vektorë në klonimin e ADN-së. Ata njihen si vektorë të fagut M13. Ato mund të manipulohen lehtë dhe të përdoren në mënyrë të ngjashme me vektorët plazmidë.
Aftësia e natyrshme e infeksionit të këtyre fagëve M13 shërben si një kualifikim i mirë për t'u përdorur si vektor në klonimin e gjeneve. Kur zhvillohet M13 në një vektor, disa elementë duhet të përfshihen në gjenomin e tij. Ata janë, një gjen për proteinën lac represor (lac I), rajoni operator-proksimal i gjenit lac Z, një promotor lac dhe një vend i shumëfishtë klonimi (polilinkeri). Kur dsDNA e M13 përdoret si vektor, ai mund të trajtohet si një vektor plazmid. Megjithatë, përdorimi i ssDNA M13 ka përparësi në renditjen e ADN-së dhe mutagjenezën e drejtuar nga vendi.
Meqenëse vektori i fagut M13 mbart vende të shumta klonimi në rajonin lacZ, vektorët e rikombinuar mund të identifikohen lehtësisht nga ekzaminimi i kolonisë blu/bardhë në pllakat e agarit që përmbajnë IPTG dhe X-Gal. Pllakat blu të prodhuara në pllaka nuk përmbajnë fagë të rikombinuar. Prandaj, fagët me inserte mund të zgjidhen për qëllimin e klonimit.
Figura 02: Bakteriofag M13
Cili është ndryshimi midis Vektorit të Fagut YAC dhe M13?
YAC vs Vektor fag M13 |
|
| YAC është një kromozom i modifikuar gjenetikisht i cili ka aftësinë të mbartë një segment të madh të ADN-së së huaj dhe të replikohet brenda qelizave të majave. | Vektori i fagut M13 është një vektor viral i zhvilluar nga bakteriofagu M13 i cili përdoret për të futur ADN-në e huaj në E Coli. |
| Qëllimi | |
| YAC u projektuan për të klonuar fragmente të mëdha të ADN-së gjenomike në maja. | Vektorët e fagut M13 përdoren për të futur ADN-në e huaj në E Coli. |
| Insert Length | |
| YAC mund të përmbajnë inserte gjenomike me madhësi megabaze (1000 kb – 2000 kb). | Madhësia e inserteve është rreth 1,500 bps. |
| Ndërtimi | |
| YAC ADN-ja është e vështirë për t'u pastruar e paprekur dhe kërkon një përqendrim të lartë për gjenerimin e sistemit vektorial YAC. | Ndodh nëpërmjet zinxhirit elektronik fotosintetik ciklik. |
| Stabilitet | |
| YAC është i paqëndrueshëm. | Fagët M13 mund të nxirren lehtësisht. |
| Madhësia | |
| Enzimat janë molekula më të mëdha. | Fagët M13 janë të qëndrueshëm se YAC. |
Përmbledhje – YAC vs Vektori i fagut M13
YAC është një sistem vektori i ndërtuar artificialisht duke përdorur një rajon specifik të kromozomit të majave për të futur segmente të mëdha të materialit gjenetik në qelizat e majave. Vektori i fagut M13 është një sistem vektori që rrjedh nga bakteriofagu M 13 i cili përdor E coli si organizëm pritës. Ky është ndryshimi kryesor midis YAC dhe M13 Fag Vector. Të dyja janë njësoj të dobishme në teknologjinë rekombinante të ADN-së dhe klonimin e gjeneve.
