Dallimi kryesor – Nitroceluloza vs Membrana najloni
Blotting është një teknikë e rëndësishme për zbulimin e sekuencave specifike të ADN-së, ARN-së dhe proteinave nga përzierjet e tyre në biologjinë molekulare. Bëhet duke përdorur një membranë të quajtur blot. Ka teknika të ndryshme blotting si blotting veriore, jugore dhe perëndimore. Përzgjedhja e një membrane të duhur për procesin e blotimit duhet të bëhet me kujdes për të parandaluar lidhjen jospecifike dhe zbulimet e gabuara. Nitroceluloza, najloni dhe PVDF janë membrana të përdorura zakonisht në teknikat e blotting. Ata kanë karakteristika të ndryshme. Dallimi kryesor midis membranës nitrocelulozë dhe najlonit është se membranat nitrocelulozë kanë potencial të lartë imobilizimi të proteinave ndërsa membranat e najlonit kanë potencial të lartë imobilizimi të acidit nukleik. Megjithatë, të dy llojet e membranave përdoren shpesh në teknikat e blotting-it.
Çfarë është një membranë nitroceluloze?
Membrana nitroceluloze është një filtër membranor i përdorur zakonisht në teknikat e blotimit të acidit nukleik dhe proteinave. Ka një potencial të lartë të lidhjes së proteinave. Prandaj, membranat nitrocelulozë përdoren gjerësisht në teknikën western blotting. Membranat nitrocelulozë janë të pajtueshme me të gjitha teknikat e hibridizimit dhe tregojnë kapacitete lidhëse superiore pa ndërhyrje. Membranat nitrocelulozë janë natyralisht hidrofile. Ata bëjnë ndërveprim hidrofil me molekulat dhe i imobilizojnë në mënyrë efikase ato në membranë. Membranat e nitrocelulozës komerciale janë të disponueshme në dy madhësi pore: 0,45 dhe 0,2 μm.
Figura 01: Membrana nitroceluloze e përdorur në western blotting
Çfarë është një membranë najloni?
Membrana najloni është një tjetër lloj membrane komerciale që përdoret në teknikat e blotting. Përdoret në mënyrë alternative me membranat nitroceluloze për blotting jugore dhe veriore. Membranat e najlonit janë ideale për blotting jugore sesa nitroceluloza për shkak të afinitetit të tyre të lartë ndaj lidhjes me ADN-në. Për shkak të disa veçorive unike të membranave të najlonit, studiuesit zakonisht përdorin membranat najloni për fshirjen jugore dhe veriore në vend të membranës mbi nitrocelulozë. Membranat najloni rekomandohen gjithashtu për zhveshje dhe riprodhim, ndryshe nga nitroceluloza.
Figura 02: Membrana najloni e përdorur për blotting jugore
Cili është ndryshimi midis Nitrocelulozës dhe Membranës Najloni?
Nitrocelulozë kundër Membranës Najloni |
|
| Membranat nitrocelulozë janë të brishtë. | Membranat e najlonit janë më pak të brishta. |
| Trajtimi | |
| Ato janë të vështira për t'u trajtuar. | Ato janë të lehta për t'u trajtuar. |
| Riprovim | |
| Membranat nitroceluloze të pambështetura janë të vështira për t'u rihetuar. | Riprovimi është i lehtë me membranat najloni. |
| Përputhshmëri me kushte të ndryshme ruajtjeje | |
| Membranat nitrocelulozë kanë më pak forcë për t'i bërë ballë kushteve të ndryshme të ruajtjes. | Membranat najloni i përgjigjen më fort kushteve të ndryshme të ruajtjes. |
| Përdor | |
| Kërkohet paravendosje. | Për membranat najloni nuk kërkohet paralagim. |
| Natyrë hidrofile | |
| Membranat nitrocelulozë janë hidrofile në natyrë, por janë më pak hidrofile se membranat najloni. | Kanë natyrë shumë hidrofile. |
| Potenciali i imobilizimit | |
| Membranat nitrocelulozë kanë më pak afinitet për acidet nukleike. Por ka një afinitet të lartë për proteinat. | Membranat e najlonit kanë një potencial të lartë lidhës me acidet nukleike sesa membranat nitrocelulozë. |
Përmbledhje – Nitroceluloza vs Membrana Najloni
Membranat nitrocelulozë dhe najloni janë fletë të veçanta që përdoren në teknikën e blotting-it për të riprodhuar modelin e brezit në xhel. Ato mundësojnë mundësinë e zbulimit të një sekuence specifike ose një proteine nga përzierjet duke i imobilizuar ato në membranë. Pasi molekulat të imobilizohen në membranë, ajo mund të përdoret si një substrat për analizën e hibridizimit me sonda të etiketuara. Membrana e nitrocelulozës përdoret zakonisht për zbulimin e proteinave në teknikën western blotting për shkak të afinitetit të lartë të lidhjes me proteinat. Membranat e najlonit përdoren shpesh për fshirjen jugore dhe veriore. Ky është ndryshimi midis membranës nitrocelulozë dhe najlonit.
