Dallimi kryesor – Klonimi vs Nënklonimi
Klonimi dhe Nënklonimi janë procedura biologjike molekulare që krijojnë qeliza ose organizma gjenetikisht identike që mbajnë ADN-në ose gjenin që janë me interes. Klonimi është një teknikë që përfshin futjen e gjenit ose ADN-së së interesuar në një vektor, riprodhimin e tij brenda një bakteri pritës dhe prodhimin e qelizave ose organizmave që janë kopje të sakta të përbërjes gjenetike. Nënklonimi është një teknikë që përfshin futjen e gjenit me interes, i cili tashmë është futur në një vektor, në një vektor sekondar, replikimin e tij brenda një bakteri pritës dhe prodhimin e kopjeve gjenetikisht identike të qelizave ose organizmave. Dallimi kryesor midis klonimit dhe nënklonimit është se, në klonim, gjeni i interesit, pasi lidhet në një vektor, vazhdon procesin e klonimit ndërsa, në nënklonim, gjeni tashmë i klonuar me interes ndahet nga vektori mëmë dhe futet përsëri në një vektor marrës dhe vazhdoni procesin.
Çfarë është Klonimi?
Klonimi është procedura e cila prodhon organizma ose qeliza gjenetikisht identike. Në natyrë, klonimi ndodh në mjetet e riprodhimit aseksual. Kur nuk ka rikombinim ose ndryshim gjenetik, qelizat bija marrin të njëjtën përbërje gjenetike të prindit. Organizmat prokariote dhe eukariote krijojnë klone me anë të ndarjes binar, lulëzimit, mitozës, etj. Në biologjinë molekulare, klonimi i gjeneve ose fragmenteve specifike të ADN-së është një metodë popullore për të studiuar strukturën dhe funksionin e atij seksioni të veçantë të ADN-së.
Objektivi kryesor i klonimit molekular është të krijojë miliona kopje të qelizave ose organizmave gjenetikisht identikë që mbajnë fragmentin e ADN-së me interes (kryesisht gjenet). Krijon organizma me kopje të sakta gjenetike të një tjetri. Kryesisht, gjenet specifike klonohen në studimet molekulare për të marrë informacion strukturor dhe funksional dhe për renditjen e ADN-së. Gjithashtu, për prodhimin e proteinave ose produkteve specifike në shkallë të gjerë, klonimi përdoret gjerësisht.
Procedura e klonimit
Hapat bazë të procedurës së klonimit janë si më poshtë.
- Identifikimi dhe izolimi i gjenit me interes. (Amplifikimi i gjenit me interes me PCR).
- Tretja e kufizuar e gjenit të interesit (Endonukleaza e kufizimit pret gjenin).
- Tretja e kufizuar e ADN-së vektoriale. (ADN-ja vektoriale pritet gjithashtu duke përdorur të njëjtën endonukleazë kufizuese).
- Futja e gjenit në vektor dhe formimi i molekulës rekombinante.
- Transformimi i vektorit rekombinant në një bakter pritës.
- Izolimi dhe identifikimi i baktereve të transformuara (vektori plazmid duhet të përmbajë një gjen të përzgjedhshëm, më së shpeshti një gjen rezistent ndaj antibiotikëve ndaj baktereve të transformuara).
- Shprehja e gjenit rekombinant brenda bujtësit.
Figura_01: Procedura e klonimit
Çfarë është Nënklonimi?
Nënklonimi është një procedurë e lëvizjes së një gjeni me interes nga një vektor në një vektor tjetër për të parë shprehjen e gjenit për të fituar funksionalitetin e dëshiruar të gjenit. Në këtë metodë, përfshihen dy vektorë; gjegjësisht, vektori prind dhe vektori i destinacionit. Insertet e klonuara zhvendosen përsëri në një vektor të dytë në nënklonim. Objektivi i transferimit të gjenit nga vektori i parë në vektorin e dytë është të përftohet diçka që nuk mund të bëhej nga vektori i parë ose të veçohet një gjen përsëri brenda fragmentit tashmë të klonuar të ADN-së dhe ta shprehë atë vetëm. Në këtë procedurë në fillim përdoren enzimat kufizuese.
Procedura e nënklonimit
Hapat bazë të nënklonimit janë si më poshtë.
- Me ndihmën e endonukleazave restriktive, ndarja e ADN-së me interes në plazmidin e dhuruesit (vektori mëmë).
- Amplifikimi i ADN-së me interes duke përdorur PCR.
- Pastrimi i produktit PCR (ADN me interes) me elektroforezë xhel.
- Hapja e plazmidit marrës nga të njëjtat endonukleaza kufizuese të përdorura për të ndarë ADN-në me interes në plazmidin mëmë.
- Lidhja e ADN-së së interesit (gjenit) në plazmidin marrës për të krijuar plazmidin e nënklonuar.
- Transformimi i vektorit të nënklonuar në një bakter pritës kompetent.
- Screening i qelizave të transformuara.
- Pastrimi i ADN-së plazmidike dhe përdorimi për renditjen e ADN-së ose shprehjen e gjeneve për të marrë produktet e dëshiruara.
Nënklonimi kryhet në rastet e izolimit të një gjeni nga grupi i klonuar i gjeneve ose kur gjenit me interes kërkohet të transferohen në një plazmid të dobishëm për të parë funksionin e saktë të gjenit me interes.
Figura_02: Procedura e nënklonimit
Cili është ndryshimi midis Klonimit dhe Nënklonimit?
Klonim vs Nënklonim |
|
| Klonimi është procedura e cila prodhon organizma ose qeliza gjenetikisht identike. | Nënklonimi është një procedurë e lëvizjes së një gjeni me interes nga një vektor në tjetrin për të parë shprehjen e gjenit për të fituar funksionalitetin e dëshiruar të gjenit. |
| Proces | |
| Ndajeni ADN-në me interes nga organizmi dhe futeni në një vektor një herë dhe klononi | ADN-ja e klonuar tashmë ndahet nga vektori i parë dhe futet në një vektor të dytë dhe klonohet. |
| Fut lëvizje nëpërmjet vektorëve | |
| Nuk lëviz insertet (ADN-ja me interes) nga një vektor në tjetrin. | Lëviz futjet nga vektori prind në vektorin e destinacionit. |
Përmbledhje – Klonimi vs Nënklonimi
Klonimi krijon qeliza ose organizma gjenetikisht identike me gjenin e futur ose ADN-në e interesit. Ai vazhdon përmes ndarjes dhe futjes së ADN-së me interes në një vektor dhe shprehje brenda një bakteri pritës. Nënklonimi ndan hapa të ngjashëm me klonimin. Megjithatë, në nënklonim, fragmenti i ADN-së i klonuar tashmë (gjeni me interes) futet në një vektor dhe transformohet në një bakter pritës. Ky është ndryshimi kryesor midis klonimit dhe nënklonimit.
