Dallimi kryesor midis BL21 dhe DH5 Alpha është se BL21 është një qelizë E. coli kompetente e gjeneruar gjenetikisht me mungesë të proteazës, e përdorur kryesisht për shprehjen e proteinave, ndërsa DH5 Alpha është një qelizë E. coli kompetente e inxhinieruar gjenetikisht me mutacion recA1 që përdoret kryesisht. për transformimin plazmid.
E. coli është një nga organizmat e famshëm të zgjedhur për prodhimin e proteinave rekombinante. Është bërë platforma më e njohur e shprehjes ndër vite. Përdoret edhe si fabrikë qelizash. BL21 dhe DH5 Alpha janë dy qeliza E. coli të modifikuara gjenetikisht të përdorura aktualisht për shprehjen e proteinave dhe transformimin e plazmidit, respektivisht.
Çfarë është BL21?
BL21 është një qelizë E.coli kompetente me mangësi të proteazës, e ndërtuar gjenetikisht, e përdorur kryesisht për shprehjen e proteinave. E. coli BL21 është një qelizë bakteriale që rrjedh nga shtami B. Ka defekte të proteazës Lon dhe proteazës së jashtme të membranës ompT. Përdoret zakonisht për shprehjen e proteinave rekombinante sepse normalisht sjell stabilitet në proteinat e shprehura. BL21 është i dobishëm për shprehjen e proteinave me ADN pCold I-IV dhe ADN pCold TF. Por kjo qelizë kompetente E. coli nuk është e destinuar për një sistem të shprehjes së proteinave duke përdorur promotorin T7, siç është sistemi pET. Arsyeja pas kësaj është se BL21 nuk shpreh polimerazën T7 ARN. Përveç kësaj, nuk rekomandohet të përdoret për ndërtimin ose përgatitjen e plazmidit pasi nuk ka mutacion recA.
Figura 01: BL21
BL21 u përshkrua për herë të parë nga Studier në 1986 pas modifikimeve të ndryshme të linjës B. Qelizat BL21 kanë mungesë të proteazës LON, e cila degradon shumë proteina të huaja. Për më tepër, i mungon një gjen tjetër që kodon për proteazën e membranës së jashtme (OmpT) funksioni i së cilës është të degradojë proteinat jashtëqelizore. Mungesa e këtyre proteinave shkakton prodhimin e suksesshëm të proteinave të huaja në qelizat E. coli BL21. Për më tepër, mutacioni i hsdSB në këto qeliza parandalon metilimin e ADN-së së huaj dhe ndërprerjen në qelizat BL21.
Çfarë është DH5 Alpha?
DH5 Alfa është një qelizë E. coli kompetente e inxhinieruar gjenetikisht me mutacion recA1 që përdoret kryesisht për transformimin e plazmidit. Qelizat DH5 Alpha E. coli janë inxhinieruar gjenetikisht nga biologu amerikan Douglas Hanahan për të maksimizuar efikasitetin e transformimit. Qeliza alfa DH5 ka tre mutacione të dallueshme: recA1, endA1 dhe lacZΔM15. recA1 është një mutacion me një pikë që zëvendëson glicinën 160 me dhe një mbetje të acidit aspartik në polipeptidin recA. Ky mutacion çaktivizon aktivitetin e rekombinazave dhe çaktivizon rikombinimin homolog. Mutacioni i endA1 çaktivizon një endonukleazë ndërqelizore e cila e pengon atë të degradojë plazmidin e futur.
Figura 02: DH5 Alfa
Për më tepër, mutacioni lacZΔM15 mundëson ekzaminimin blu-bardhë të qelizave të transformuara. Këto qeliza janë qeliza kompetente. Ato shpesh përdoren me transformimin e klorurit të kalciumit për të futur plazmidin e dëshiruar. U identifikua nga kërkimet e fundit se qeliza DH5 Alfa me metodën Hanahan ishte qeliza kompetente më efikase për transformimin plazmid.
Cilat janë ngjashmëritë midis BL21 dhe DH5 Alpha?
- BL21 dhe DH5 Alpha janë dy E.coli të modifikuar gjenetikisht
- Të dyja janë qeliza kompetente.
- Ato përbëhen nga mutacione të dallueshme.
- Të dyja nuk kanë habitat natyror.
- Këto përdoren për qëllime laboratorike si studimet e shprehjes dhe procedurat e klonimit.
Cili është ndryshimi midis BL21 dhe DH5 Alpha?
BL21 është një qelizë E. coli kompetente me mangësi të proteazës, e ndërtuar gjenetikisht, e përdorur kryesisht për shprehjen e proteinave. Nga ana tjetër, DH5 Alpha është një qelizë E. coli kompetente e inxhinieruar gjenetikisht me mutacion recA1 që përdoret kryesisht për transformimin e plazmidit. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis BL21 dhe DH5 Alpha. Për më tepër, qeliza BL21 E. coli nuk ka mutacion recA1, ndërsa qeliza DH5 Alpha E. coli ka mutacion recA1.
Infografia e mëposhtme liston ndryshimet midis BL21 dhe DH5 Alpha në formë tabelare.
Përmbledhje – BL21 vs DH5 Alpha
Stajet jopatogjene të E. coli janë zhvilluar gjenetikisht nga shkencëtarët për studime laboratorike të shprehjes dhe qëllime klonimi. BL21 dhe DH5 Alpha janë dy qeliza E. coli të modifikuara gjenetikisht. BL21 përdoret kryesisht për studimet e shprehjes së proteinave. Nga ana tjetër, DH5 Alpha përdoret kryesisht për qëllime të transformimit të plazmidit. Kështu, kjo është përmbledhja e ndryshimit midis BL21 dhe DH5 Alpha.
