Dallimi kryesor midis analizës BCA dhe Bradford është se analiza BCA kërkon kohë dhe më pak e saktë, ndërsa analiza Bradford është e shpejtë dhe e saktë.
BCA dhe analiza Bradford janë dy metoda të analizës për përcaktimin e përqendrimit të proteinave. Këto dy analiza kanë parime të ndryshme të analizës dhe dallime në saktësinë e tyre.
Çfarë është analiza BCA?
Analiza BCA ose analiza e acidit bicinkoninik është një analizë biokimike e dobishme në përcaktimin e përqendrimit total të proteinës në një tretësirë. Kjo metodë është emëruar gjithashtu si analiza Smith sipas shpikësit të saj, Paul K. Smith. Kjo metodë analitike tregon ngjashmëri me analizën e proteinës Lowry, analizën e proteinës Bradford ose reagentin biure. Ne mund të vëzhgojmë përqendrimin total të proteinave në një kampion të caktuar përmes një ndryshimi të ngjyrës së tretësirës së mostrës, e cila shkon nga jeshile në vjollcë. Ky ndryshim i ngjyrës ndodh në proporcion me përmbajtjen e proteinave. Më pas ne mund të përdorim një teknikë kolorimetrike për të analizuar intensitetin e ngjyrës dhe përmbajtjen e proteinave në kampion.
Metoda BCA e vlerësimit të proteinave
Kur merret parasysh mekanizmi i analizës BCA, tretësira tipike BCA përmban një tretësirë shumë alkaline me një pH prej rreth 11.25 dhe përbërësit në këtë tretësirë përfshijnë acidin bicinkoninik, karbonat natriumi, bikarbonat natriumi, tartrate natriumi dhe sulfat bakri (II) pentahidrat. Kjo analizë varet kryesisht nga dy reaksione kimike: reduktimi i bakrit (II) në bakër (I) nga lidhjet peptide në proteina dhe kelimi i dy molekulave të acidit bicinkoninik me jonin bakri (I), duke rezultuar në një kompleks me ngjyrë vjollce që mund të thithin dritën në gjatësi vale 562 nm. Në reagimin e parë, sasia e bakrit (II) e reduktuar nga lidhjet peptide është proporcionale me sasinë e proteinës në mostër.
Çfarë është Analiza Bradford?
Anali i Bradford është një metodë analitike spektroskopike e dobishme për matjen e përqendrimit të proteinave në një tretësirë. Kjo metodë u zhvillua nga Marion M. Bradford në 1976, dhe është një metodë relativisht e shpejtë dhe e saktë.
Reagimi me ngjyra i proteinave dhe reagentit Bradford
Ne mund ta përdorim këtë metodë për të përcaktuar përqendrimin e sasisë së proteinave në një mostër. Reaksioni kimik që ndodh në kampion gjatë kësaj analize varet vetëm nga përbërja e aminoacideve të proteinës në kampion.
Metoda Bradford e Vlerësimit të Proteinave
Kur merret në konsideratë metoda e kësaj analize, është një analizë kolorimetrike e proteinave që bazohet në zhvendosjen e absorbimit të bojës së quajtur Coomassie Brilliant Blue G-250. Në përgjithësi, kjo ngjyrë ekziston në tre forma si formë anionike (blu), formë neutrale (jeshile) dhe formë kationike (e kuqe). Prandaj, në kushte acidike, boja ndryshon ngjyrën e saj nga e kuqe në blu. Kjo është për shkak të lidhjes së proteinës me ngjyrën. Në të kundërt, nëse nuk ka proteinë për t'u lidhur me bojën, ndryshimi i ngjyrës nuk shfaqet, tretësira merr një ngjyrë të kuqe-kafe. Kjo ngjyrë është e aftë të formojë një kompleks të fortë, jokovalent me grupin karboksil të proteinës nëpërmjet forcave Van der Waal dhe tërheqjeve elektrostatike.
Cili është ndryshimi midis BCA dhe analizës Bradford?
BCA dhe analiza Bradford janë dy metoda të analizës për përcaktimin e përqendrimit të proteinave. Këto dy analiza kanë parime të ndryshme të vlerësimit dhe dallime në saktësinë e tyre. Dallimi kryesor midis analizës BCA dhe Bradford është se analiza BCA kërkon kohë dhe më pak e saktë, ndërsa analiza Bradford është e shpejtë dhe e saktë.
Infografia e mëposhtme përmbledh ndryshimet midis analizës BCA dhe Bradford në formë tabelare.
Përmbledhje – BCA vs Bradford Assay
Analiza BCA ose analiza e acidit bicinkoninik është një analizë biokimike e dobishme në përcaktimin e përqendrimit total të proteinës në një tretësirë. Analiza Bradford është një metodë analitike spektroskopike e dobishme në matjen e përqendrimit të proteinave në një tretësirë. Dallimi kryesor midis analizës BCA dhe Bradford është se BCA kërkon kohë dhe më pak e saktë, ndërsa analiza e Bradford është e shpejtë dhe e saktë.
