Dallimi kryesor – Transfeksioni kalimtar kundrejt Stabilitetit
Transfeksioni është një proces i cili përfshihet në transferimin e gjeneve të qelizave eukariote duke përdorur metoda kimike ose fizike. Transfeksioni mund të klasifikohet në dy lloje kryesore të quajtura transfeksioni kalimtar dhe transfeksioni i qëndrueshëm. Gjatë transfeksionit kalimtar, gjeni i interesit nuk arrin të integrohet me gjenomën e bujtësit dhe shprehet përkohësisht brenda bujtësit për një afat të shkurtër, ndërsa, në transfeksion të qëndrueshëm, gjeni i interesit integrohet me gjenomën e bujtësit dhe mbahet për një kohë të gjatë në disa breza.. Ky është ndryshimi kryesor midis transfektimit kalimtar dhe të qëndrueshëm. Në të dyja rastet, transfeksioni është i suksesshëm dhe gjenet janë të shprehura.
Çfarë është Transfeksioni Kalimtar?
Transfeksioni është një mjet i rëndësishëm për futjen e gjeneve në qelizat eukariote. Midis dy llojeve të transfeksionit, transfeksioni kalimtar është një mënyrë e zakonshme në transferimin e gjeneve. Nëpërmjet një vektori, gjenet e huaja transformohen brenda qelizave bujtëse. Pasi ADN-ja e huaj hyn në qelizën pritëse, ajo ka dy opsione. Ai ose mund të integrohet me gjenomin e bujtësit dhe të përsëritet, ose të qëndrojë brenda pa u integruar në gjenom. Transfeksioni kalimtar shfaq shprehjen e përkohshme të gjeneve të futura pa u integruar në gjenomën e bujtësit. Gjenet shprehin dhe prodhojnë proteinën e koduar derisa qeliza të ndahet. Megjithatë, për shkak të pamundësisë së integrimit, ai nuk mund të përsëritet dhe të hyjë në brezat e ardhshëm. Ky lloj transfeksioni është i suksesshëm për një periudhë të shkurtër kohe. Gjatë ndarjes së qelizave ose për shkak të disa faktorëve të tjerë, ADN-ja e huaj i nënshtrohet degradimit. Transfeksioni kalimtar tregohet kur ADN-ja e huaj është në formën e ADN-së shumë të mbështjellë.
Figura 01: Transfeksioni kalimtar
Çfarë është Transfeksioni i Qëndrueshëm?
Transfeksioni i qëndrueshëm tregon integrim të suksesshëm të gjenit të huaj në gjenomin e bujtësit. Sapo ADN-ja e huaj hyn brenda qelizës pritëse, një pjesë e ADN-së së huaj integrohet me gjenomin e bujtësit dhe bëhet pjesë e tij. Prandaj, ADN-ja e huaj gjithashtu replikohet dhe kalon në brezat e ardhshëm kur gjenomi pritës replikohet. Ky lloj transfeksioni është kompleks dhe i rrallë. Megjithatë, për shkak të transfektimit të qëndrueshëm në gjenom, ky tipar ruhet për një periudhë më të gjatë prej disa brezash.
Transfeksioni i qëndrueshëm është një proces i vështirë dhe kërkon një shpërndarje efektive të ADN-së dhe marrjen e qelizave të ADN-së së huaj në gjenomin e saj. Prandaj, ADN lineare favorizon transfektimin e qëndrueshëm sesa ADN rrethore. Megjithatë, shkalla e qëndrueshme e transfektimit është afërsisht një në 104 qeliza të transformuara. Transfeksioni i qëndrueshëm mund të vërehet nga bashkëtransformimi i një shënuesi të përzgjedhshëm dhe kryerja e përzgjedhjes artificiale në një medium.
Figura 02: Transfeksion i qëndrueshëm
Cili është ndryshimi midis Transfeksionit Kalimtar dhe Stabil?
Transient vs Transfeksion i qëndrueshëm |
|
| ADN-ja e huaj nuk integrohet në një gjenom pritës. | ADN e huaj integrohet me gjenomin e bujtësit dhe bëhet pjesë e tij. |
| Përsëritje brenda hostit | |
| gjenet e transfektuara në mënyrë të përkohshme nuk replikohen brenda strehuesit. Prandaj gjenet nuk u kalohen brezave të ardhshëm. | Gjenet riprodhohen brenda strehuesit dhe u kalohen brezave të ardhshëm. |
| Kohëzgjatja kohore e shprehjes së gjenit | |
| Gjenet shprehen për një periudhë të caktuar kohore dhe pas kësaj, ato shkatërrohen. | Gjenet bëhen pjesë e gjenomit dhe shprehen brenda brezit për një periudhë të gjatë kohore. |
| Përdor | |
| Kjo është e dobishme për studimin e efekteve të shprehjes afatshkurtër të gjeneve ose produkteve të gjeneve. | Kjo është e dobishme për studimin afatgjatë të efekteve të shprehjeve të gjeneve. |
| Zbulimi i transfeksionit | |
| Gjenet shprehen dhe mund të zbulohen lehtësisht duke futur një gjen raportues. | Transfeksioni i qëndrueshëm mund të zbulohet lehtësisht duke futur një shënues të përzgjedhshëm dhe duke zgjedhur nëpërmjet përzgjedhjes artificiale në media. |
| Ndodhja dhe procesi | |
| Transfeksioni kalimtar është i zakonshëm dhe jo kompleks për t'u kryer. | Transfeksioni i qëndrueshëm është i rrallë në shfaqje dhe kompleks për t'u kryer. |
| Natyra e ADN-së | |
| ADN me mbimbështjellje të lartë janë të përshtatshme për transfeksion kalimtar. | ADN lineare janë të përshtatshme për transfeksion të qëndrueshëm. |
| Aplikacione | |
| Kjo përdoret për studime të rënies së gjeneve ose heshtjes me ARN frenuese, prodhimin e proteinave në një shkallë të vogël | Kjo përdoret për prodhimin e proteinave në një shkallë të gjerë, studime farmakologjike afatgjatë, terapi gjenetike, kërkime mbi mekanizmat e rregullimit gjenetik afatgjatë |
Përmbledhje – Transfeksioni kalimtar kundrejt Stabilitetit
Transfeksionet kalimtare dhe të qëndrueshme janë dy lloje të transfeksioneve të paraqitura gjatë transferimit të gjenit në qelizat eukariote nga sisteme me bazë jovirale. ADN-ja e huaj e transformuar nuk integrohet me gjenomën e bujtësit në transfeksionin kalimtar ndërsa integrohet me gjenomën e bujtësit në transfeksion të qëndrueshëm. ADN-së me mbështjellje rrethore tregohet transfeksion kalimtar ndërsa ADN lineare preferon transfeksion të qëndrueshëm. Ky është ndryshimi midis transfeksionit kalimtar dhe atij të qëndrueshëm. Megjithatë transfeksioni kalimtar është më i zakonshëm dhe më i lehtë në krahasim me transfeksionin e qëndrueshëm. Por zgjedhja e njërit nga dy varet nga qëllimi i transferimit të gjeneve dhe kohëzgjatja e projektit kërkimor.
