PCR vs PCR në kohë reale
PCR ose reaksioni zinxhir i polimerazës është një zbulim i revolucionarizuar në biologjinë molekulare moderne, i cili u zhvillua për herë të parë nga kimisti Kary Mullis në 1983. Ai lejon që një sekuencë e vetme në një ADN kompleks të përforcohet për analizë. Ideja bazë e PCR është se dy primerë, të cilët janë plotësues me fijet e kundërta të një sekuence të ADN-së, janë të orientuar drejt njëri-tjetrit; abetaret prodhojnë fillesa plotësuese, ku secila përmban primerin tjetër. Prandaj, rezultati është një sasi e madhe e një sekuence që korrespondon me ADN-në që shtrihet midis dy abetareve. Enzima e ADN polimerazës përdoret për të zgjatur primerët në PCR. ADN polimeraza është një enzimë e qëndrueshme termike dhe ka aftësinë të mbijetojë në temperatura të larta (94 deri në 95 °C) që përdoret për denatyrimin e ADN-së shabllon.
PCR përfshin tre hapa, domethënë, raunde të përsëritura denatyrimi, pjekja e primerëve dhe sinteza e ADN-së. Për kryerjen e këtij reaksioni përdoret një makineri termocikluese në mënyrë që të mund të programohet për të ndryshuar shpejt dhe saktë temperaturat. Aplikimet e PCR janë hetimet penale, gjurmët e gishtave të ADN-së, zbulimi i patogjenëve dhe analiza e ADN-së së specieve të hershme njerëzore.
Çfarë është PCR konvencionale?
Ka tre faza kryesore të PCR konvencionale, domethënë; Faza e amplifikimit të ADN-së, ndarja e PCR dhe zbulimi i produkteve. Ndarja e segmenteve të ADN-së zakonisht bëhet me elektroforezë me xhel agarozë. Produktet më pas ngjyrosen me brom etheiduim. Së fundi, zbulimi arrihet duke vizualizuar shiritat në xhel nën dritën UV. Prandaj, rezultatet përfundimtare të PCR konvencionale nuk shprehen si numra. Normalisht PCR-ja konvencionale është në gjendje të zbulojë vetëm një parametër të vetëm.
Çfarë është PCR në kohë reale?
PCR në kohë reale mund të zbulojë amplifikimin e produkteve, pasi produktet sintetizohen. Me zhvillimin e teknologjisë, PCR është bërë një teknikë shumë e njohur, veçanërisht për zbulimin dhe identifikimin e baktereve në ushqime. PCR në kohë reale përdor një sistem ngjyrash floreshente dhe termocikler të pajisur me aftësinë e zbulimit fluoreshente.
Cili është ndryshimi midis PCR konvencionale dhe PCR në kohë reale?
• PCR konvencionale kërkon më shumë kohë pasi përdor elektroforezë xhel për të analizuar produktet e përforcuara të PCR. Në të kundërt, PCR në kohë reale kërkon më pak kohë pasi mund të zbulojë amplifikimi gjatë fazave të hershme të reaksionit.
• PCR në kohë reale mbledh të dhëna në fazën e rritjes eksponenciale të PCR ndërsa PCR tradicionale mbledh të dhëna në pikën përfundimtare të reaksionit.
• Rezultatet e pikës përfundimtare të PCR-së konvencionale mund të mos jenë shumë të sakta, por rezultatet e PCR-së në kohë reale janë shumë të sakta.
• PCR në kohë reale është më e ndjeshme se PCR konvencionale.
• PCR konvencionale ka rezolucion shumë të dobët ndërsa PCR në kohë reale mund të zbulojë shumë pak ndryshime për shkak të rezolucionit të lartë.
• Zbulimi i pikës së fundit të PCR-së konvencionale ka një gamë të shkurtër dinamike ndërsa zbulimi i PCR në kohë reale ka një gamë të gjerë dinamike.
• Ndryshe nga PCR konvencionale, teknikat e zbulimit të automatizuar gjenden në PCR në kohë reale.
• PCR konvencionale është shumë e sofistikuar dhe kërkon punë më shumë se PCR në kohë reale.
• Ndryshe nga PCR në kohë reale, PCR konvencionale nuk mund të dallojë midis baktereve të vdekura dhe të gjalla.
• PCR në kohë reale përdor sistemin e ngjyrosjes fluoreshente për të zbuluar produktet ndërsa PCR konvencionale përdor bromurin e etidiumit dhe dritën UV për të vizualizuar brezat në mediumin e xhelit të agarozës.
