Dallimi kryesor midis imunoprecipitimit dhe bashkëimunoprecipitimit është se imunoprecipitimi është një teknikë që precipiton një proteinë jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik, ndërsa koimunoprecipitimi është një teknikë që precipiton komplekset e proteinave të paprekura jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik.
Ndërveprimi antigjen-antitrup është një ndërveprim kimik specifik midis antitrupave të prodhuar nga qelizat B dhe antigjeneve (proteinave) gjatë një reaksioni imunitar. Normalisht, antigjenet e tretshëm kombinohen me antitrupa të tretshëm në prani të një elektroliti në temperaturë të tretshme dhe pH në mënyrë që të krijojnë një kompleks të pazgjidhshëm të dukshëm. Ky quhet reaksion i reshjeve. Prandaj, imunoprecipitimi dhe bashkëimunoprecipitimi janë dy lloje të reaksioneve të precipitimit që përdoren në mënyrë rutinore në laboratorë për të identifikuar proteina të tilla si antigjenet.
Çfarë është imunoprecipitimi?
Imunoprecipitimi është një teknikë e precipitimit të një proteine nga një tretësirë duke përdorur një antitrup specifik. Ndonjëherë, kjo teknikë njihet edhe si imunoprecipitim individual i proteinave. Imunoprecipitimi përdor një antitrup për të izoluar një proteinë të përzgjedhur me interes nga lizati i qelizave. Antitrupi pastron proteinën e tij specifike të synuar ose antigjenin nga një përzierje. Antitrupi lidhet me proteinën dhe kompleksi antitrup-antigjen tërhiqet nga kampioni. Në konfigurimin eksperimental, kompleksi antigjen-antitrup nxirret duke përdorur agarozë të shoqëruar me proteina A/G ose rruaza magnetike. Më vonë, rruazat janë larë, dhe proteina e interesit është elutur. Proteina ose antigjeni i pastruar i përftuar nga imunoprecipitimi verifikohet me një sërë teknikash të tilla si analiza imunosorbente e lidhur me enzimën (ELISA) dhe western blot (WB).
Figura 01: Imunoprecipitimi
Për më tepër, proteinat ose antigjenet e izoluara mund të kuantifikohen dhe identifikohen nëpërmjet spektrometrisë së masës duke përdorur modele të tretjes enzimatike bazuar në sekuencën parësore. Ekzistojnë disa konsiderata përpara se të filloni një eksperiment imunoprecipitimi: zgjedhja e formatit të metodës, lidhja e proteinave dhe rruazave, zgjedhja e antitrupit dhe izotipit të duhur primar dhe kontrolli negativ.
Çfarë është Koimunoprecipitimi?
Koimunoprecipitimi është një teknikë e precipitimit të komplekseve të proteinave të paprekura jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik. Koimunoprecipitimi në përgjithësi funksionon duke përzgjedhur një antitrup specifik që synon një proteinë të njohur (antigjen) që besohet të jetë një anëtar i një kompleksi më të madh proteinash. Duke synuar anëtarin e njohur me një antitrup specifik, është e mundur që të tërhiqet i gjithë kompleksi proteinik nga tretësira. Kjo mundëson identifikimin e anëtarëve të panjohur të kompleksit. Koncepti i nxjerrjes së komplekseve proteinike nga tretësira nganjëherë quhet mekanizëm "tërheqjeje".
Figura 02: B Koimunoprecipitimi
Koimunoprecipitimi është një teknikë e fuqishme që përdoret për të analizuar ndërveprimet protein-proteinë. Qëllimi kryesor i bashkëimunoprecipitimit është identifikimi i partnerëve ndërveprues si ligandët, kofaktorët ose molekulat sinjalizuese ndaj proteinës së interesit. Për më tepër, koimunoprecipitimi është një teknikë efektive që përdoret për të ndarë proteinat nga serumi, lizati i qelizave, indi i homogjenizuar ose media e kushtëzuar.
Cilat janë ngjashmëritë midis imunoprecipitimit dhe bashkëimunoprecipitimit?
- Imunoprecipitimi dhe bashkëimunoprecipitimi janë dy lloje të teknikave të bazuara në reagimin e precipitimit.
- Të dyja teknikat mund të përdoren për të identifikuar antigjenin e synuar nëpërmjet një antitrupi specifik.
- Të dyja teknikat varen fuqimisht nga ndërveprimi antigjen-antitrup.
- Ato përdoren në mënyrë rutinore në laboratorët klinikë.
Cili është ndryshimi midis imunoprecipitimit dhe bashkëimunoprecipitimit?
Imunoprecipitimi është një teknikë që precipiton një proteinë jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik, ndërsa bashkëimunoprecipitimi është një teknikë që precipiton komplekset e proteinave të paprekura jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik. Kështu, ky është ndryshimi kryesor midis imunoprecipitimit dhe bashkëimunoprecipitimit. Për më tepër, imunoprecipitimi përdoret më shpesh në laboratorë, ndërsa koimunoprecipitimi nuk përdoret zakonisht në laboratorë.
Infografia e mëposhtme paraqet ndryshimet midis imunoprecipitimit dhe bashkëimunoprecipitimit në formë tabelare për krahasim krah për krah.
Përmbledhje – Imunoprecipitimi vs Koimunoprecipitimi
Imunoprecipitimi dhe bashkëimunoprecipitimi janë dy lloje të teknikave të bazuara në reaksionin e precipitimit që varen nga ndërveprimi antigjen-antitrup. Teknika e imunoprecipitimit precipiton një proteinë jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik, ndërsa teknika e bashkëimunoprecipitimit precipiton komplekset e proteinave të paprekura jashtë tretësirës duke përdorur një antitrup specifik. Pra, kjo përmbledh ndryshimin midis imunoprecipitimit dhe bashkëimunoprecipitimit.
