Dallimi kryesor FPLC dhe HPLC është se FPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që pastron biomolekulat e mëdha si proteinat, nukleotidet dhe peptidet, ndërsa HPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që ndan komponimet me peshë të vogël molekulare.
Kromatografia e lëngshme është një teknikë që përdoret për të ndarë një kampion në përbërësit e tij individualë. Kjo ndarje ndodh për shkak të ndërveprimit të mostrave specifike me faza të lëvizshme dhe stacionare. Komponentët brenda një kampioni ndahen në bazë të afinitetit të secilit komponent për fazën e lëvizshme në kromatografinë e lëngshme. Ndërsa faza e lëvizshme dhe kampioni kalojnë nëpër një kolonë, përbërësit e kampionit fillojnë të ndahen në breza që mund të zbulohen nga spektroskopia UV-VIS. Prandaj, FPLC dhe HPLC janë dy lloje të teknikave të kromatografisë së lëngshme.
Çfarë është FPLC?
FPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që pastron biomolekulat e mëdha si proteinat, nukleotidet dhe peptidet. Kromatografia e lëngshme e proteinave të shpejta (FPLC) u zhvillua dhe u tregtua për herë të parë në Suedi nga kompania Pharmacia në 1982. Shpesh përdoret për të analizuar ose pastruar përzierjet e proteinave. Kjo ndodh bazuar në parimin e afiniteteve të përbërësve të mostrës për lëngun lëvizës (faza e lëvizshme) dhe një material i ngurtë poroz (faza e palëvizshme). Në FPLC, faza e lëvizshme është një tampon, dhe faza e palëvizshme është një rrëshirë e përbërë nga rruaza. Zakonisht përbëhet nga agarozë të ndërlidhur e paketuar në një kolonë cilindrike qelqi ose plastike.
Figura 01: Aparati FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
Në shumicën e strategjisë FLPC, përdoret rrëshira e shkëmbimit të joneve. Prandaj, proteina e interesit do të lidhet me rrëshirën nga një ndërveprim i ngarkesës. Teknika FLPC përdor gjithashtu dy buferë: buffer 1 (buferi i rrjedhshëm) dhe buffer 2 (buferi i elucionit). Fillimisht, kur një përzierje e tamponit dhe e mostrës kalojnë nëpër kolonë, proteina e interesit në përzierje do të lidhet me rrëshirën nga një ndërveprim i ngarkesës. Por proteina e interesit disociohet dhe kthehet në tretësirë në tampon elucioni kur tamponi i elucionit kalon nëpër kolonë në fund të procesit. Më vonë, tretësira (eluanti që përmban proteina me interes) kalon nëpër dy detektorë, të cilët matin përqendrimin e kripës dhe përqendrimin e proteinave. Ndërsa çdo proteinë është elutur, ajo shfaqet si një "kulm" gjatë zbulimit dhe mund të mblidhet për përdorim të mëtejshëm.
Çfarë është HPLC?
HPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që ndan komponimet me peshë të vogël molekulare. Në vitin 1969, HPLC e parë u prodhua komercialisht nga Waters Corporation, SHBA. Në kromatografinë e lëngshme me performancë të lartë (HPLC), një përzierje mostre (analiti) në një tretës (faza e lëvizshme) pompohet përmes një kolone me material paketues kromatografik (faza e palëvizshme) në presion të lartë. Përzierja e mostrës bartet nga një rrymë gazi bartës lëvizës i heliumit ose azotit.
Figura 02: HPLC (Kromatografi e lëngshme me performancë të lartë)
Përbërësit në përzierjen e mostrës që kanë sasinë më të vogël të ndërveprimit me fazën stacionare ose më shumë ndërveprim me fazën e lëvizshme do të dalin nga kolona më shpejt. Nga ana tjetër, përbërësit në përzierjen e mostrës që kanë sasinë më të madhe të ndërveprimit me fazën stacionare ose sasinë më të vogël të ndërveprimit me fazën e lëvizshme do të dalin nga kolona më ngadalë. Bazuar në parimin e mësipërm të ndërveprimit, përbërësit e përzierjes së mostrës mund të ndahen. Për më tepër, detektori i instrumentit identifikon çdo përbërës të përzierjes së mostrës që del nga kolona. HPLC përdoret për të inspektuar mostrat mjedisore dhe biologjike për praninë ose mungesën e komponimeve të njohura, të tilla si barnat, toksinat ose pesticidet. Përdoret në industri të ndryshme si farmaceutike, mjedisore, mjekësi ligjore dhe kimike.
Cilat janë ngjashmëritë midis FPLC dhe HPLC?
- FPLC dhe HPLC janë lloje të kromatografisë së lëngshme.
- Të dyja përdoren për të ndarë dhe identifikuar mostrat biologjike.
- Ata kanë një fazë të lëvizshme të lëngshme dhe një fazë të ngurtë stacionare.
- Të dyja teknikat përdorin një kolonë për të kaluar nëpër kampion.
- Këto teknika përdorin pompa, detektorë, valvola dhe softuer për ndarjen dhe zbulimin e mostrës.
Cili është ndryshimi midis FPLC dhe HPLC?
FPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që përdoret për të pastruar biomolekulat e mëdha si proteinat, nukleotidet dhe peptidet. HPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që përdoret për të ndarë komponimet me peshë të vogël molekulare. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis FPLC dhe HPLC. Për më tepër, FPLC përdor monitorët e pH dhe përçueshmërisë, si dhe puse si kolektorë fraksionesh. Në të kundërt, HPLC nuk përdor monitorues të pH dhe përcjellshmërisë dhe kolektorë fraksionesh.
Infografia e mëposhtme liston më shumë ndryshime midis FPLC dhe HPLC në formë tabelare.
Përmbledhje – FPLC vs HPLC
Kromatografia është një teknikë analitike laboratorike që përdoret për ndarjen e përbërësve nga një përzierje. Ndahet në disa lloje si kromatografia me kolonë, kromatografia me gaz, kromatografia e lëngshme, kromatografia me shkëmbim jonesh etj. FPLC dhe HPLC janë dy lloje të teknikave të kromatografisë së lëngshme. FPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që përdoret për të pastruar biomolekulat e mëdha si proteinat, nukleotidet dhe peptidet. Nga ana tjetër, HPLC është një lloj kromatografie e lëngshme që përdoret për të ndarë komponimet me peshë të vogël molekulare. Kështu, kjo është përmbledhja e ndryshimit midis FPLC dhe HPLC.
