Dallimi kryesor midis kromatofokusimit dhe fokusimit izoelektrik është se kromatofokusimi është një lloj metode kromatografie kolone e cila përdor rrëshirat e shkëmbimit të joneve ndërsa fokusimi izoelektrik është një lloj teknikë elektroforeze që përdor xhel me gradient pH të imobilizuar..
Kromatofokusimi dhe fokusimi izoelektrik janë dy teknika që ndajnë proteinat sipas pikave të tyre izoelektrike. Si kromatofokusimi ashtu edhe fokusimi izoelektrik kanë fuqi të madhe zgjidhëse. Kromatofokusimi është një metodë kromatografie me kolonë me rezolucion të lartë ndërsa fokusimi izoelektrik është një metodë e ndarjes elektroforetike. Për më tepër, kromatofokusimi nuk përdor një fushë elektrike ndërsa fokusimi izoelektrik ka nevojë për një fushë elektrike.
Çfarë është Kromatofokusimi?
Kromatofokusimi është një lloj kromatografie me elucione të larta që ndan proteinat sipas dallimeve në pikën e tyre izoelektrike. Ai përdor një kolonë rrëshirë shkëmbimi jonesh dhe një gradient pH të zhvilluar nga brenda. Ndryshe nga fokusimi izoelektrik, kromatofokusimi nuk përfshin një fushë elektrike. Kromatofokusimi është një teknikë e fuqishme pastrimi e cila mund të zgjidhë molekula shumë të ngjashme edhe që ndryshojnë vetëm me 0,02 njësi pH. Prandaj, kromatofokusimi është më i përshtatshmi si një hap i fundit lustrimi kur kërkohet rezolucion i lartë në ndarjen e komponentëve shumë të ngjashëm.
Në kromatofokusimin, kampioni aplikohet në kolonë duke e përzier me tampon fillestar. Proteinat që janë në një pH mbi pikën e tyre izoelektrike janë të ngarkuara negativisht dhe ato mbeten afër majës së kolonës ndërsa proteinat e tjera që janë në pH nën pikën e tyre izoelektrike, migrojnë poshtë kolonës. Proteina me pikën më të lartë izoelektrike elurohet e para ndërsa proteina me pikën më të ulët izoelektrike elurohet e fundit nga kolona. Kjo teknikë ndikohet nga disa faktorë si precipitimi i proteinave dhe lineariteti i gradientit të pH.
Çfarë është Fokusimi Izoelektrik?
Fokusimi izoelektrik është një teknikë që ndan molekula të ndryshme bazuar në pikën e tyre izoelektrike. Njihet gjithashtu si elektrofokusimi. Kjo teknikë përdoret shpesh për ndarjen e proteinave në një xhel. Në fokusimin izoelektrik, kampioni shtohet në xhel me gradient pH të imobilizuar (IPG). Xhel IPG është një matricë xhel akrilamide e kopolimerizuar me një gradient pH. Proteinat migrojnë drejt katodës derisa të gjejnë rajonin e pH të pikave të tyre izoelektrike. Kur një proteinë arrin pH që nuk ka ngarkesë neto, migrimi pushon dhe jep një brez të palëvizshëm. Po kështu, çdo proteinë jep një brez në një pikë në gradientin e pH që korrespondon me pikën e saj izoelektrike.
Figura 01: Fokusimi izoelektrik
Fokusimi izoelektrik është hapi i parë i elektroforezës dydimensionale të xhelit. Në atë teknikë, proteinat fillimisht ndahen sipas pikave të tyre izoelektrike me fokusim izoelektrik dhe më pas ndahen nga pesha e tyre molekulare përmes SDS-PAGE.
Cilat janë ngjashmëritë ndërmjet fokusimit kromato dhe fokusimit izoelektrik?
- Fokusimi kromato dhe fokusimi izoelektrik janë dy metoda shumë zgjidhëse.
- Të dyja bazohen në pikën izoelektrike të proteinave.
- Këto teknika përdorin një gradient pH.
- Të dyja procedurat janë informuese për karakterizimin e varianteve të hemoglobinës njerëzore.
- Ato mund të zgjidhin molekulat ku vlerat e pI ndryshojnë me aq pak sa 0,02 njësi pH.
Cili është ndryshimi midis fokusimit kromato dhe fokusimit izoelektrik?
Kromatofokusimi është një teknikë kromatografie me kolonë me rezolucion të lartë që ndan proteinat sipas pikës së tyre izoelektrike. Në të kundërt, fokusimi izoelektrik është një teknikë elektroforetike e cila ndan proteinat sipas pikës së tyre izoelektrike me aplikimin e një fushe elektrike përgjatë një gradienti pH të formuar në një kapilar. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis fokusimit kromato dhe fokusimit izoelektrik.
Një tjetër ndryshim midis kromatofokusimit dhe fokusimit izoelektrik është se kromatofokusimi nuk përfshin një fushë elektrike ndërsa fokusimi izoelektrik ka nevojë për një fushë elektrike.
Përmbledhje – Kromatofokusimi vs Fokusimi izoelektrik
Kromatofokusimi dhe fokusimi izoelektrik janë dy teknika të ngjashme që kanë aftësi të lartë zgjidhëse të molekulave, veçanërisht molekulave shumë të ngjashme. Kromatofokusimi është një teknikë kromatografie me kolonë me rezolucion të lartë ndërsa fokusimi izoelektrik është një metodë elektroforeze. Kromatofokusimi nuk përfshin një fushë elektrike, ndryshe nga fokusimi izoelektrik. Kështu, kjo përmbledh ndryshimin midis fokusimit kromato dhe fokusimit izoelektrik.
