Dallimi kryesor – Citometria e rrjedhës kundrejt FACS
Në kontekstin e teorisë së qelizave, qelizat janë njësia bazë strukturore dhe funksionale e të gjithë organizmave të gjallë. Renditja e qelizave është një metodologji që përdoret për të ndarë qelizat e ndryshme sipas veçorive fiziologjike dhe morfologjike. Ato mund të kenë karakteristika ndërqelizore ose jashtëqelizore. Ndërveprimi i ADN-së, ARN-së dhe proteinave konsiderohen si veti ndërvepruese ndërqelizore, ndërsa forma, madhësia dhe proteinat e ndryshme sipërfaqësore konsiderohen si veti jashtëqelizore. Në shkencën e ditëve moderne, metodologjitë e klasifikimit të qelizave kanë ndihmuar në hulumtimin e ndryshëm në studimet biologjike dhe gjithashtu në vendosjen e parimeve të reja nëpërmjet kërkimit mbi mjekësinë. Renditja e qelizave kryhet në metodologji të ndryshme të cilat përfshijnë si primitive me më pak pajisje ashtu edhe metodologji të avancuara teknologjike me përdorimin e makinerive të sofistikuara. Citometria e rrjedhës, klasifikimi i qelizave të aktivizuara fluoreshente (FACS), përzgjedhja e qelizave magnetike dhe klasifikimi i qelizave të vetme janë metodologjitë kryesore të përdorura. Citometria e rrjedhës dhe FACS janë zhvilluar për të diferencuar qelizat sipas vetive të tyre optike. FACS është një lloj i specializuar i citometrisë së rrjedhës. Citometria e rrjedhës është një metodologji e cila përdoret gjatë analizës së një popullate heterogjene qelizash sipas molekulave të ndryshme të sipërfaqes qelizore, madhësisë dhe vëllimit, e cila lejon hetimin e qelizave të vetme. FACS është një proces me anë të të cilit një përzierje mostre e qelizave renditet sipas karakteristikave të tyre të shpërndarjes së dritës dhe fluoreshencës në dy ose më shumë kontejnerë. Ky është ndryshimi kryesor midis citometrisë së rrjedhës dhe FACS.
Çfarë është Flow Citometria?
Citometria e rrjedhës është një metodë e cila përdoret për të ekzaminuar dhe përcaktuar shprehjen e molekulave ndërqelizore dhe sipërfaqes së qelizës dhe për të përcaktuar dhe karakterizuar lloje të veçanta të qelizave. Përdoret gjithashtu në përcaktimin e vëllimit të qelizave dhe madhësisë së qelizave dhe për të vlerësuar pastërtinë e nënpopullatave të izoluara. Kjo lejon vlerësimin me shumë parametra të qelizave të vetme pothuajse në të njëjtën kohë. Citometria e rrjedhës përdoret në matjen e intensitetit të fluoreshencës që prodhohet për shkak të antitrupave të etiketuar në mënyrë fluoreshente, të cilët ndihmojnë në identifikimin e proteinave ose ligandëve që lidhen me qelizat shoqëruese.
Figura 01: Citometria e rrjedhës
Në përgjithësi, citometria e rrjedhës përfshin kryesisht tre nënsisteme. Ato janë fluidika, elektronika dhe optika. Në citometrinë e rrjedhës, janë në dispozicion pesë komponentë kryesorë të cilët përdoren në klasifikimin e qelizave. Ato janë, një qelizë rrjedhëse (një rrymë lëngu që përdoret për t'i transportuar ato dhe për t'i lidhur qelizat për procesin e sensorit optik), një sistem matjeje (mund të jetë i sistemeve të ndryshme duke përfshirë, llambat e merkurit dhe ksenonit, të ftohjes me ujë me fuqi të lartë ose lazer me ftohje me ajër me fuqi të ulët ose lazer me diodë), një ADC; Sistem konvertues analog në dixhital, sistem amplifikues dhe një kompjuter për analiza. Përvetësimi është procesi me të cilin mblidhen të dhënat nga mostrat duke përdorur citometrin e rrjedhës. Ky proces ndërmjetësohet nga një kompjuter i cili është i lidhur me citometrin e rrjedhës. Softueri i pranishëm në kompjuter analizon informacionin e futur në kompjuter nga citometri i rrjedhës. Softueri ka gjithashtu aftësinë për të rregulluar parametrat e eksperimentit duke kontrolluar citometrin e rrjedhës.
Çfarë është FACS?
Në kontekstin e citometrisë së rrjedhës, klasifikimi i qelizave të aktivizuara me fluoreshencë (FACS) është një metodë e cila përdoret në diferencimin dhe klasifikimin e një kampioni të një përzierjeje qelizash biologjike. Qelizat janë të ndara nga dy ose më shumë enë. Metoda e klasifikimit bazohet në veçoritë fizike të qelizës e cila përfshin shpërndarjen e dritës dhe karakteristikat e fluoreshencës së qelizës. Kjo është një teknikë e rëndësishme shkencore, e cila mund të përdoret për të marrë rezultate të besueshme sasiore dhe cilësore të sinjaleve të fluoreshencës që emetohen nga çdo qelizë. Gjatë FACS, fillimisht, përzierja e parapërfituar e qelizave; një pezullim drejtohet në qendër të një rryme të ngushtë lëngu që rrjedh me shpejtësi. Rrjedha e lëngut është projektuar për të ndarë qelizat në pezullim bazuar në diametrin e secilës qelizë. Një mekanizëm vibrimi zbatohet në rrjedhën e pezullimit që rezulton në formimin e pikave individuale.
Figura 02: FACS
Sistemi është kalibruar për të krijuar një pikëz të vetme me një qelizë. Pak para formimit të pikave, pezullimi i rrjedhës lëviz përgjatë një aparati matës të fluoreshencës, i cili zbulon karakteristikën e fluoreshencës së secilës qelizë. Në pikën e formimit të pikave, vendoset një unazë ngarkuese elektrike, e cila induktohet në unazë para matjes së intensitetit të fluoreshencës. Pasi pikat janë formuar nga rryma e pezullimit, një ngarkesë bllokohet brenda pikave e cila më pas hyn në një sistem devijimi elektrostatik. Sipas tarifës, sistemi i kthen pikat në kontejnerë të ndryshëm. Metoda e aplikimit të tarifës ndryshon sipas sistemeve të ndryshme të përdorura në FACS. Pajisja e përdorur në FACS njihet si ndarës i qelizave të aktivizuara me fluoreshencë.
Cila është ngjashmëria midis citometrisë së rrjedhës dhe FACS?
Citometria e rrjedhës dhe FACS janë zhvilluar për të diferencuar qelizat sipas vetive të tyre optike
Cili është ndryshimi midis citometrisë së rrjedhës dhe FACS?
Citometria e rrjedhës vs FACS |
|
| Citometria e rrjedhës është një metodologji e cila përdoret gjatë analizës së një popullate heterogjene qelizash sipas molekulave, madhësisë dhe vëllimit të ndryshëm të sipërfaqes qelizore, e cila lejon hetimin e qelizave të vetme. | FACS është një proces me anë të të cilit një përzierje mostër e qelizave ndahet sipas karakteristikave të tyre të shpërndarjes së dritës dhe fluoreshencës në dy ose më shumë kontejnerë. |
Përmbledhje – Citometria e rrjedhës kundrejt FACS
Qeliza është njësia bazë strukturore dhe funksionale e të gjithë organizmave të gjallë. Renditja e qelizave është procesi me të cilin qelizat izolohen dhe diferencohen në kategori të ndryshme bazuar në vetitë e tyre ndërqelizore dhe jashtëqelizore. Citometria e rrjedhës dhe FACS janë dy metodologji të rëndësishme në klasifikimin e qelizave. Të dy proceset zhvillohen për të diferencuar qelizat sipas vetive të tyre optike. Citometria e rrjedhës është një metodologji e cila përdoret gjatë analizës së një popullate heterogjene qelizash sipas molekulave të ndryshme të sipërfaqes qelizore, madhësisë dhe vëllimit, e cila lejon hetimin e qelizave të vetme. FACS është një proces me anë të të cilit një përzierje mostre e qelizave renditet sipas karakteristikave të tyre të shpërndarjes së dritës dhe fluoreshencës në dy ose më shumë kontejnerë. Ky është ndryshimi midis citometrisë së rrjedhës dhe FACS.
Shkarkoni versionin PDF të Citometrisë së Rrjedhës kundrejt FACS
Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimit të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Diferenca midis citometrisë së rrjedhës dhe FACS
