Dallimi kryesor – Nxjerrja e ADN-së kundër ARN-së
Studimi i ADN-së dhe ARN-së janë aspekte jetike për të kuptuar konceptet bazë të biologjisë molekulare, bioteknologjisë dhe gjenetikës. Nxjerrja e mostrave të pastërta të ADN-së dhe ARN-së është e nevojshme për të kryer procedura eksperimentale gjatë këtyre studimeve. Dallimi kryesor midis nxjerrjes së ADN-së dhe ARN-së është se procesi i nxjerrjes së ADN-së pastron ADN-në ndërsa nxjerrja e ARN-së pastron ARN-në. Procesi i nxjerrjes së ADN-së ka tre hapa të ndryshëm: lizën qelizore dhe katabolizmin e lipideve dhe proteinave të membranës, grumbullimin e kataboliteve me tretësirë kripe të koncentruar dhe precipitimin e ADN-së me etanol. Procedura me tre hapa mund të përbëhet nga dy hapa opsionale. Procesi i pastrimit të ARN-së përbëhet nga katër hapa të ndryshëm: shtimi i tiocianatit guanidium për lizën e qelizave, denatyrimi i proteinave duke përfshirë ribonukleazat, ndarja e ARN-së me shtimin e kloroformit dhe fenolit dhe larja e precipitatit duke përdorur etanol.
Çfarë është nxjerrja e ADN-së?
Nxjerrja e ADN-së është një proces fizik dhe kimik i cili përdoret për të pastruar ADN-në nga një mostër. Nxjerrja e ADN-së është një aspekt i rëndësishëm në kontekstin e biologjisë molekulare dhe shkencave mjeko-ligjore. Procesi përbëhet nga tre hapa bazë. Fillimisht duhet të merren qelizat e interesit. Më pas, liza e qelizave lehtësohet për të thyer membranën qelizore, e cila hap qelizën dhe ekspozon citoplazmën së bashku me ADN-në. Surfaktantët ose detergjentë të tjerë mund të përdoren për të lizuar lipidet nga membrana qelizore ndërsa proteinat e pranishme katabolizohen nga proteazat. Ky është një hap fakultativ. Pasi qeliza lizohet, grumbullimi i molekulave të katabolizuar lehtësohet nga solucionet e koncentruara të kripës. Pasohet nga centrifugimi i tretësirës e cila ndan grumbullimet e mbeturinave nga ADN-ja. Në këtë fazë, ADN-ja e diferencuar përzihet me reagentët dhe kripërat e përdorura gjatë ciklit qelizor.
Figura 01: Nxjerrja e ADN-së
Për ta pastruar më tej, mund të përdoren hapat e mëposhtëm. Një metodë është precipitimi i etanolit, i cili përfshin përzierjen e etanolit të ftohtë me akull me kampionin e ndarë të ADN-së. ADN-ja është e pazgjidhshme në alkool dhe në këtë mënyrë prodhon një topth për shkak të grumbullimit të molekulave të ADN-së së bashku. Acetati i natriumit shtohet në këtë proces për të rritur shkallën e reshjeve duke rritur forcën jonike. Përveç procesit të precipitimit të etanolit, për këtë mund të nxitet edhe procesi i nxjerrjes së fenol-kloroformit. Në këtë metodë, fenoli denatyron proteinat e pranishme në mostër. Pasi të centrifugohen, proteinat e denatyruara do të mbeten në fazën organike ndërsa molekulat e ADN-së që janë të përziera me kloroform do të jenë të pranishme në fazën ujore. Kloroformi do të largojë mbetjet e fenolit. Pasi të përfundojë nxjerrja, ADN-ja mbahet e tretur në tampon TE ose ujë ultra të pastër.
Çfarë është nxjerrja e ARN?
Pastrimi i ARN-së është një proces me të cilin ARN pastrohet nga një kampion biologjik. Për shkak të pranisë së ribonukleazës në qeliza dhe inde, ky proces është i ndërlikuar. Enzima e ribonukleazës ka aftësinë të degradojë ARN-në me shpejtësi. Natyra kimike e ribonukleazave është jashtëzakonisht e qëndrueshme dhe është e vështirë t'i çaktivizosh ato. Neutralizimi i ribonukleazave është një opsion. Meqenëse kjo enzimë është e pranishme kudo në qeliza dhe inde, janë zhvilluar teknika të veçanta për nxjerrjen e ARN-së. Nga metodat e shumta, metoda e zakonshme është nxjerrja e tiocinatit të guanidiniumit-fenol-kloroformit.
Figura 02: Ekstraktimi i ARN-së
Metoda e ekstraktimit të Guanidinium tiocinate-fenol-kloroform varet nga centrifugimi dhe ndarja fazore. Përzierja që do të centrifugohet përbëhet nga mostra ujore dhe një tretësirë e ngopur me ujë që përbëhet nga fenoli dhe kloroformi. Pasi të centrifugohet, tretësira përbëhet nga një fazë ujore e sipërme dhe një fazë organike më e ulët në kushte pH neutrale (pH 7-8). ARN është e pranishme në fazën ujore. Faza organike zakonisht përbëhet nga proteina të tretura në fenol dhe lipide të tretura në kloroform. Shtohet një agjent kaotropik (një molekulë që ka aftësinë të thyejë lidhjet hidrogjenore midis molekulave të ujit); kjo njihet si, tiocianat guanidinium. Ky agjent ka aftësinë për të denatyruar proteinat të cilat përfshijnë ribonukleaza që mund të degradojnë ARN-në dhe përfshihen në lizën e qelizave. Ai gjithashtu ndan rRNA nga proteinat ribozomale. Hapi i fundit i pastrimit të ARN-së është larja e precipitimit të fazës ujore me etanol. ARN mund të pastrohet gjithashtu duke përdorur azot të lëngshëm.
Cilat janë ngjashmëritë ndërmjet nxjerrjes së ADN-së dhe ARN-së?
- Të dy proceset e nxjerrjes përdorin kimikate të dëmshme si fenoli dhe kloroformi.
- Centrifugimi është një teknikë thelbësore për të dy proceset.
- Etanoli përdoret për të larë precipitatin dhe për të marrë ADN ose ARN të pastruar.
Cili është ndryshimi midis nxjerrjes së ADN-së dhe ARN-së?
Nxjerrja e ADN-së kundër ARN-së |
|
| Nxjerrja e ADN-së është një proces që nxjerr ADN-në nga një organizëm ose mostër. | Nxjerrja e ARN-së është një proces që nxjerr ARN nga një kampion. |
| Hapat | |
| Procesi i nxjerrjes së ADN-së përbëhet nga tre hapa të ndryshëm me dy hapa opsionalë. | Procesi i nxjerrjes së ARN-së përbëhet nga katër hapa të ndryshëm. |
| Reagents | |
| Sifaktantët, proteazat (opsionale), alkooli, kloroformi, fenoli, acetati i natriumit përdoren për nxjerrjen e ADN-së. | Tiocianat guanidium, kloroform, fenol, etanol përdoren për nxjerrjen e ARN-së. |
Përmbledhje – Ekstraktimi i ADN-së kundrejt ARN-së
Nxjerrja e ADN-së dhe ARN-së janë aspekte jetike të procedurave eksperimentale për studimin e biologjisë molekulare, gjenetikës dhe bioteknologjisë. Të dy proceset përfshijnë reagentë të ngjashëm, por nxjerrja e ARN-së përdor një reagent të veçantë të njohur si tiocianat Guanidium, i cili zvogëlon aktivitetin e ribonukleazave. Ky është ndryshimi kryesor midis nxjerrjes së ADN-së dhe ARN-së.
Shkarko versionin PDF të Ekstraktimit të ADN-së kundrejt ARN-së
Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimit të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Dallimi midis nxjerrjes së ADN-së dhe ARN-së
