Dallimi kryesor midis nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve është se në nxjerrjen e ADN-së së bimëve, është e nevojshme të thyhet muri qelizor duke bluar indin në akull të thatë ose azot të lëngshëm në mënyrë që të çlirohet përmbajtja qelizore gjatë nxjerrjes së ADN-së së kafshëve., nuk është e nevojshme të kryhet ky hap pasi qelizat shtazore nuk kanë mur qelizor.
ADN gjenomike është materiali gjenetik i qelizave bimore dhe shtazore. ADN-ja gjenomike është unike për çdo bimë ose kafshë individuale. Nxjerrja e ADN-së e ADN-së me cilësi të mirë është parakusht për kërkimin molekular. ADN-ja e organizmave nxirret për identifikimin, diagnostikimin e sëmundjeve, zbulimin e gjeneve dhe sekuencave specifike, për qëllime mjekoligjore, testimin e atësisë, renditjen e gjenomit dhe zhvillimin e barnave, etj. Metoda e nxjerrjes së ADN-së ndryshon në varësi të llojit të qelizave – nëse është një qelizë shtazore apo qelizë bimore.
Çfarë është nxjerrja e ADN-së së bimëve?
ADN në qelizat bimore nxirret për studime të ndryshme molekulare. Kërkohet të nxirret ADN gjenomike e paprekur dhe e pastër. Prandaj, ekzistojnë lloje të ndryshme të protokolleve të nxjerrjes së ADN-së të cilat janë të ndryshme nga protokollet e nxjerrjes së ADN-së nga qelizat shtazore. Kjo është për shkak se qelizat bimore kanë një mur qelizor i cili duhet të thyhet për të hequr përmbajtjen qelizore.
Nxjerrja zakonisht bëhet duke bluar indet e bimëve në akull të thatë ose azot të lëngshëm duke përdorur një llaç dhe shtypës. Pastaj membranat qelizore prishen dhe përmbajtja qelizore nxirret në një tampon ekstraktimi. Kjo zakonisht bëhet duke përdorur një detergjent; SDS (sodium dodecil sulfate) ose CTAB (cetiltrimetilamonium bromid) tampon. ADN-ja e çliruar mbrohet nga nukleazat endogjene duke përdorur një agjent kelatues si EDTA. Për më tepër, proteinat ndahen nga ADN-ja duke përdorur kloroform ose fenol.
Figura 01: Nxjerrja e ADN-së së bimëve
Bimët sintetizojnë polisaharide dhe polifenole, duke përfshirë flavonoidet dhe metabolitët e tjerë dytësorë. Këto komponime ndërhyjnë në nxjerrjen e ADN-së gjenomike të pastër. Prandaj, shumica e protokolleve të nxjerrjes së ADN-së së bimëve përfshijnë një hap tjetër, siç është teknika e gradientit të densitetit të klorurit cezium për të eliminuar këto komponime.
Shumica e protokolleve të nxjerrjes së ADN-së rekomandojnë përdorimin e mostrave të gjetheve të freskëta për nxjerrjen e ADN-së. Disa metoda nuk përfshijnë kimikate të rrezikshme si azoti i lëngshëm dhe fenoli. Protokolli CTAB (Cetyl trimetilammonium bromide) është një protokoll popullor i nxjerrjes së ADN-së së bimëve që lehtëson nxjerrjen e ADN-së gjenomike të bimëve me cilësi të lartë. Është një metodë e thjeshtë, e sigurt, e besueshme dhe me kosto efektive për nxjerrjen e ADN-së së bimëve. Shumica e metodave të tjera janë versione të modifikuara të metodës CTAB.
Çfarë është Nxjerrja e ADN-së së Kafshëve?
Nxjerrja e ADN-së së kafshëve është nxjerrja e ADN-së gjenomike nga qelizat e kafshëve për analiza molekulare. Ndryshe nga nxjerrja e ADN-së së bimëve, prishja e murit qelizor nuk është e nevojshme për qelizat shtazore pasi atyre u mungon një mur qelizor. Qelizat e gjakut janë lloji më i zakonshëm i qelizave shtazore që përdoren për qëllime të ndryshme.
Figura 02: Nxjerrja e ADN-së
Metoda fenol-kloroform është një nga zgjedhjet më të mira për qelizat e gjakut. Rendimenti dhe cilësia e ADN-së janë të larta gjatë nxjerrjes së ADN-së nga kjo metodë. Është një protokoll i nxjerrjes së ADN-së me lëng të lëngshëm dhe kjo metodë ndan molekulat e ADN-së në bazë të tretshmërisë së tyre në tretësirat e papërziershme. Fenoli, kloroformi dhe alkooli izoamil janë tre përbërësit kryesorë të kësaj metode.
Cilat janë ngjashmëritë midis nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve?
- Gjatë nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve, membranat qelizore duhet të prishen.
- ADN-ja duhet të mbrohet nga nukleazat endogjene.
- Për më tepër, prerja e ADN-së duhet të parandalohet.
- Kitet komerciale janë të disponueshme për nxjerrjen e ADN-së së bimëve dhe ADN-së së kafshëve.
- Shumica e metodave të nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve kanë nevojë për modifikim dhe standardizim të vazhdueshëm.
Cili është ndryshimi midis nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve?
Dallimi kryesor midis nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve është se nxjerrja e ADN-së së bimëve kërkon bluarjen e indeve bimore në akull të thatë ose azot të lëngshëm në mënyrë që të thyejë murin qelizor ndërsa nxjerrja e ADN-së së kafshëve nuk kërkon këtë hap pasi ato kafshë qelizat nuk kanë një mur qelizor. Metoda CTAB është një nga metodat më të mira për nxjerrjen e ADN-së së bimëve ndërsa metoda fenol-kloroform është një nga metodat më të mira për nxjerrjen e ADN-së së kafshëve.
Më poshtë infografik tregon ndryshimet midis nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve.
Përmbledhje – Nxjerrja e ADN-së së bimëve kundër kafshëve
Disponohen metoda të ndryshme për nxjerrjen e ADN-së nga lloje të ndryshme qelizash. Prandaj, protokollet e nxjerrjes së ADN-së së bimëve ndryshojnë nga protokollet e nxjerrjes së ADN-së së qelizave shtazore. Nxjerrja e ADN-së së bimëve kërkon prishjen e murit qelizor, membranës qelizore dhe membranës bërthamore ndërsa nxjerrja e ADN-së së kafshëve kërkon prishjen e membranës qelizore dhe membranës bërthamore. Më e rëndësishmja, nxjerrja e ADN-së e qelizave shtazore nuk kërkon prishjen e mureve të qelizave duke bluar në akull të thatë ose azot të lëngshëm. Kështu, ky është ndryshimi kryesor midis nxjerrjes së ADN-së së bimëve dhe kafshëve.
