Dallimi kryesor – Nitroceluloza vs PVDF
Western blotting është një metodë që lejon zbulimin dhe përcaktimin sasior të proteinave specifike nga një kampion proteinash. Besueshmëria e teknikës varet nga përzgjedhja e një membrane të saktë për thithjen e proteinave nga xheli. Ekzistojnë lloje të ndryshme të membranave mikroporoze. Membranat nitrocelulozë dhe PVDF janë dy membrana të tilla të preferuara nga studiuesit për shkak të atributeve të tyre të veçanta ndaj llojeve të tjera të membranave. Përzgjedhja midis nitrocelulozës ose PVDF është gjithashtu një sfidë tjetër në western blotting. Si nitroceluloza ashtu edhe PVDF kanë një kapacitet të lartë absorbues të proteinave. Dallimi kryesor midis membranës nitrocelulozë dhe PVDF është se membranat nitrocelulozë nuk kanë aftësinë për të hequr antitrupat dhe për të ripërdorur membranën për riprodhimin e antitrupave ndërsa membranat PVDF kanë aftësi zhveshjeje dhe ripërdorimi.
Çfarë është nitroceluloza?
Nitroceluloza është një polimer i prodhuar duke trajtuar celulozën me acid nitrik dhe përdoret për të bërë membrana mikroporoze në biologjinë molekulare, veçanërisht për teknikat e blotimit si blotimi jugor, verior dhe perëndimor. Madhësitë e poreve të membranave nitroceluloze variojnë nga 3 deri në 20 μm. Membranat mikroporoze nitrocelulozë lehtësojnë zbulimin e reaksionit imunokimik që ndodh në sipërfaqen e membranës. Prandaj, membranat nitrocelulozë përdoren shpesh për imobilizimin e proteinave dhe zbulimin e proteinave specifike në western blotting. Membranat nitrocelulozë gjithashtu mund të imobilizojnë glikoproteinat dhe acidet nukleike.
Membranat nitrocelulozë preferohen në analizat e rrjedhës anësore për shkak të disa veçorive. Membranat nitrocelulozë thithin proteinat në një përqendrim të lartë. Tretësi i përdorur për të lagur membranën nuk e zvogëlon përthithjen e proteinës së membranës nitrocelulozë. Membranat e nitrocelulozës mund të priten lehtësisht në madhësinë e dëshiruar të xhelit dhe të transferojnë proteinat nga xheli në membranë me transferim elektrik ose kapilar. Nitroceluloza lejon rrjedhjen më të shpejtë të proteinave përmes membranës me potencial të lartë lidhës. Nitroceluloza tregon një forcë të përmirësuar të trajtimit. Një tjetër atribut i veçantë i membranës nitrocelulozë është se ajo mund të ngjitet lehtësisht me ngjitës jo-tretës rezistent ndaj ujit në mbështetëse të ndryshme plastike.
Figura 01: Membrana nitroceluloze për western blotting
Çfarë është PVDF?
Difluoridi poliviniliden (PVDF) është fluoropolimer i prodhuar nga polimerizimi i difluoridit të vinilidenit dhe ka një aftësi të lartë imobilizuese të proteinave. Prandaj, membranat mikroporoze të bëra nga PVDF përdoren në teknikat western blotting për të analizuar proteinat specifike nga përzierjet e proteinave. Membranat PVDF mund të përdoren gjithashtu për analizën e aminoacideve dhe renditjen e proteinave. Karakteristika më e rëndësishme e membranës PVDF mbi membranën nitroceluloze është se ajo mund të hiqet lehtësisht nga antitrupat dhe të ripërdoret për sondat e mëpasshme të antitrupave.
Membranat PVDF janë më të trasha se membranat nitroceluloze; pra, më rezistent ndaj dëmtimeve gjatë ripërdorimit. Membranat PVDF janë shumë hidrofobike. Prandaj, ato duhet të zhyten në metanol ose izopropanol përpara përdorimit.
Cili është ndryshimi midis nitrocelulozës dhe PVDF?
Nitroceluloza vs PVDF |
|
| Nitroceluloza është një polimer i përbërë nga celulozë. | PVDF është një fluoropolimer i prodhuar nga polimerizimi i difluoridit viniliden. |
| Madhësia e poreve të membranës | |
| Madhësitë tipike të poreve janë 0.1, 0.2 ose 0.45μ | Madhësitë tipike të poreve janë 0.1, 0.2 ose 0.45μm |
| Kapaciteti i lidhjes së proteinave | |
| Nitroceluloza ka një kapacitet lidhës proteinash prej 80 deri në 100 μg/cm2. | PVDF ka një kapacitet lidhës proteinash prej 170 deri në 200 μg/cm2. |
| Ndjeshmëri | |
| Kjo ka një ndjeshmëri të ulët në krahasim me PVDF. | Kjo ka një ndjeshmëri të lartë. |
| Zbulimi i proteinave me shprehje të ulët | |
| Meqenëse ndjeshmëria është e ulët në membranat nitrocelulozë, ajo nuk është e përshtatshme për zbulimin e proteinave me shprehje të ulët. | Kjo është më e përshtatshme për zbulimin e proteinave të shprehura pak për shkak të ndjeshmërisë së saj të lartë. |
| Zhurma në sfond | |
| Kjo ka zhurmë më të ulët të sfondit | Kjo ka zhurmë më të lartë në sfond. |
| Ndërveprimet me proteinat | |
| Molekulat e proteinave lidhen me membranat nitrocelulozë nëpërmjet ndërveprimeve hidrofobike. | Proteinat lidhen me membranat PVDF nëpërmjet ndërveprimeve hidrofobike dhe dipole. |
| Natyra e membranës | |
| Nitroceluloza është e brishtë dhe e brishtë. Megjithatë, versionet e nitrocelulozës janë të disponueshme dhe ato janë rezistente. | PVDF është më e qëndrueshme dhe ka rezistencë më të lartë kimike. |
| Aftësia për të hequr dhe ripërdorur | |
| Nitroceluloza mund të ketë vështirësi në zhveshjen dhe riprodhimin pa humbur sinjalin. | PVDF është ideale për riprovimin dhe renditjen e aplikacioneve. |
| Përshtatshmëri | |
| Nitroceluloza është ideale për zbulimin e proteinave me peshë të ulët molekulare. | PVDF është më i përshtatshëm për zbulimin e proteinave me peshë më të lartë molekulare. |
| Përdorime të tjera | |
| Nitroceluloza mund të përdoret për analizën e acidit nukleik dhe blotting me pika/slot. | PVDF mund të përdoret për renditjen e proteinave dhe sistemet e analizës së fazës së ngurtë. |
| Kosto | |
| Kjo është më e lirë se membranat PVDF. | Kjo është më e shtrenjtë se membranat nitroceluloze. |
| Nevoja për lagim paraprak | |
| Membranat nitrocelulozë nuk kërkojnë njomje paraprake me metanol | Membranat PVDF kërkojnë njomje paraprake me metanol. |
Përmbledhje – Nitroceluloza vs PVDF
Membranat nitrocelulozë ishin membranat e para të përdorura në treg për analizën e rrjedhës anësore. Kanë një kapacitet të lartë për thithjen e proteinave. Prandaj, membranat nitrocelulozë përdoren në western blotting. PVDF është një lloj tjetër membrane që përdoret në western blotting dhe gjithashtu ka një kapacitet të lartë absorbues të proteinave. Të dy llojet përdoren në western blotting për analizën e proteinave. Sidoqoftë, membranat PVDF kanë atribute më të veçanta, duke i bërë ato më të përshtatshme se membranat nitrocelulozë për western blotting. Por, membranat nitrocelulozë janë më të përshtatshme për zbulimin e proteinave me peshë të ulët molekulare, membranat PVDF janë më të përshtatshme për zbulimin e proteinave me peshë të lartë molekulare. Ky është ndryshimi midis membranave nitrocelulozë dhe PVDF.
