Dallimi kryesor – Letra kundrejt kromatografisë së shtresës së hollë kundrejt kolonës
Kromatografia me letër, kromatografia me shtresë të hollë dhe kromatografia me kolonë janë tre lloje të teknikave kromatografike. Dallimi kryesor midis kromatografisë së letrës, kromatografisë së shtresës së hollë dhe kromatografisë së kolonës bazohet në llojin e fazës stacionare të përdorur në teknikën e kromatografisë. Kromatografia e letrës përdor një letër celuloze si fazë të palëvizshme, kromatografia me shtresë të hollë përdor alumin ose xhel silicë si fazë të palëvizshme, ndërsa kromatografia e kolonës përdor një kolonë të mbushur me një material të përshtatshëm matricë si fazë të palëvizshme.
Në procesin e ndarjes dhe identifikimit të biomolekulave si proteinat dhe karbohidratet, kromatografia është një teknikë e rëndësishme biofizike e përdorur. Kromatografia ndan përbërjet në bazë të tretshmërisë, madhësisë dhe ngarkesës së tyre. Bazuar në mekanizmin e ndarjes, kromatografia përdor mekanizma të tillë si shkëmbimi i joneve, thithja, ndarja dhe përjashtimi i madhësisë dhe ekzistojnë tre teknika kromatografike; gjegjësisht, letër, kromatografi me shtresë të hollë dhe kolonë. Kromatografia e letrës bazohet në përthithjen e lëngshme të ngurtë dhe tretshmërinë e përbërjes, dhe përdor një letër celuloze si fazë stacionare. Kromatografia me shtresë të hollë bazohet në adsorbimin e molekulave në lëng të ngurtë. Ajo ka një fazë të palëvizshme që është bërë zakonisht nga alumini ose xhel silicë dhe fazën e lëvizshme që është tretësi. Kromatografia e kolonës përdor një kolonë të mbushur me një matricë që përdoret për të ndarë molekulat kryesisht bazuar në madhësinë, afinitetin ose ngarkesën e tyre.
Çfarë është kromatografia në letër?
Kromatografia në letër është lloji më i thjeshtë i kromatografisë që përdoret dhe nuk përdoret për kërkime të gjera. Përdoret kryesisht në laboratorët e studentëve për të identifikuar biomolekulat si aminoacidet dhe karbohidratet e pranishme në përzierje. Kromatografia në letër përdor një fazë stacionare që bëhet duke përdorur letër celuloze ose letër filtri Whatman dhe një fazë të lëvizshme që zakonisht përgatitet duke përdorur tretës organikë si n-butanol, etj. Faza stacionare është e ngopur me ujë, duke e bërë fazën stacionare të lëngshme. Kështu, kur komponimet dallohen dhe lihen të rrjedhin në prani të fazës së lëvizshme, në varësi të tretshmërisë së përbërjeve, ato ndahen. Kështu, me zhvillimin e kromatogramit, ngjyrosja mund të bëhet për të përcaktuar gjatësinë e rrjedhës së secilit përbërës. Faktori i mbajtjes mund të llogaritet në këtë mënyrë.
Figura 01: Kromatografi në letër
Kromatografia e letrës mund të klasifikohet më tej si kromatografi letre ngjitëse dhe kromatografi letre zbritëse në varësi të drejtimit të tretësit që qarkullon.
Çfarë është kromatografia me shtresë të hollë?
Kromatografia me shtresë të hollë ose TLC është një teknikë e përdorur zakonisht për të identifikuar aminoacide të ndryshme të pranishme në një përzierje ose për identifikimin e proteinave. Teknika e ndarjes bazohet në adsorbimin e ngurtë-lëngshëm. Gjatë kromatografisë me shtresë të hollë, një pllakë e bërë nga alumini ose xhel silicë përdoret si fazë stacionare. Përzierja e tretësve ndryshon sipas kërkesës dhe mund të përdorë kombinime të ndryshme të përbërjeve organike si n-butanol, acid acetik dhe ujë për të përgatitur tretësin. Komponimet që do të ndahen njollosen në pjatë dhe zhyten në përzierjen e tretësit. Pasi tretësi udhëton lart bazuar në veprimin kapilar të dhënë nga pllaka, komponimet e ndotura në pjatë lëvizin gjithashtu në varësi të tretshmërisë së tyre në tretës.
Figura 02: Kromatografia me shtresë të hollë
Zbulimi i njollave pas kromatogramit bëhet me procedura të ndryshme ngjyrosjeje. Disa përdorin ngjyrosje me ninhidrinë që është një metodë mjaft toksike e ngjyrosjes. Kromatogramet moderne të shtresës së hollë përdorin teknika fluoreshence për të parë kromatogramin pas ekzekutimit. Në varësi të distancave që ka përshkuar, mund të llogaritet koha e mbajtjes së secilit përbërës. Kjo mund të përdoret për të identifikuar llojin e përbërjes së ndarë në bazë të përzierjes së përdorur. TLC përdoret kryesisht për të identifikuar aminoacidet në një përzierje proteinash dhe gjithashtu për të ndarë lloje të ndryshme të monosakarideve të pranishme në një përzierje.
Çfarë është kromatografia me kolonë?
Kromatografia me kolonë është një term i gjerë që përdoret për të përshkruar shumë lloje të teknikave të kromatografisë që përdorin metodën e ndarjes së bazuar në kolonë. Në kromatografinë e kolonës, një kolonë fizike përdoret me një material paketues për të ndarë përbërjet. Ndarja mund të bazohet në vetitë e ndryshme fizike të shfaqura nga komponimet. Këto veti mund të jenë ngarkesa, madhësia, konformimi 3D dhe kapaciteti lidhës, etj. Kështu, kolona e mbushur me materialin e matricës vepron si fazë e palëvizshme dhe tamponi i larjes i aplikuar në kolonë vepron si fazë lëvizëse.
Nëse molekulat ndahen në bazë të madhësisë, materiali i paketimit paketohet në atë mënyrë që të lërë pore që komponimet të kalojnë nëpër të. Kështu, molekulat më të mëdha që nuk mund të rrjedhin nëpër pore eliminohen së pari, ndërsa molekulave më të vogla u duhet shumë më shumë kohë për t'u elutur.
Figura 03: Kromatografia e kolonës
Nëse molekulat ndahen në bazë të ngarkesës së tyre, faza stacionare do të përmbajë ose një shkëmbyes anion ose kation nga i cili përbërësit do të tërhiqen në bazë të ngarkesës së tyre. Kështu gjatë hapit të larjes, përbërësit e palidhur do të eluentohen. Me shtimin e tamponit të elucionit, komponimet e ngarkuara të lidhura do të eluohen. Zbulimi i këtyre eluentëve bazohet kryesisht në teknikat spektrofotometrike.
Cilat janë ngjashmëritë midis kromatografisë së shtresës së hollë letre dhe kromatografisë me kolonë?
- Kromatografia me shtresë të hollë letre dhe kromatografi me kolonë përdoren tre teknika për ndarjen e biomolekulave si aminoacidet, proteinat dhe karbohidratet.
- Teknikat e kromatografisë me shtresë të hollë letre dhe kolonë kanë një fazë të lëvizshme dhe një fazë stacionare.
- Teknikat e kromatografisë me shtresë të hollë letre dhe kolonë përdorin mekanizma biofizikë për ndarje.
Cili është ndryshimi midis kromatografisë së shtresës së hollë letre dhe kolonës?
Letër kundër kromatografisë me shtresë të hollë kundrejt kromatografisë kolone |
|
| Kromatografi në letër | Kromatografia në letër është një teknikë kromatografike që përdoret për të ndarë përbërësit bazuar në përthithjen e lëngshme-lëng dhe tretshmërinë e përbërjes. Ai përdor një letër celuloze si fazë të palëvizshme. |
| Kromatografia me shtresë të hollë | Kromatografia me shtresë të hollë është një tjetër teknikë kromatografike e bazuar në adsorbimin e molekulave në lëng të ngurtë. Ka një fazë të palëvizshme të bërë nga alumini ose xhel silicë dhe një tretës si faza e lëvizshme, që është tretës. |
| Kromatografia e kolonës | Kromatografia e kolonës përdor një kolonë të mbushur me një matricë që përdoret për të ndarë molekulat kryesisht bazuar në madhësinë, afinitetin ose ngarkesën e tyre. |
| Faza stacionare | |
| Kromatografi në letër | Letra e bërë nga nitroceluloza Whatman përdoret si fazë stacionare në kromatografinë e letrës. |
| Kromatografia me shtresë të hollë | Alumina ose xhel silicë përdoret si fazë stacionare e kromatografisë së shtresës së hollë. |
| Kromatografia e kolonës | Një kolonë e mbushur me material paketues të përshtatshëm përdoret si fazë stacionare në kromatografinë e kolonës. |
| Faza celulare | |
| Kromatografi në letër | Tretësi që rrjedh është faza e lëvizshme e kromatografisë së letrës. |
| Kromatografia me shtresë të hollë | Tretësi që rrjedh është faza e lëvizshme e kromatografisë së shtresës së hollë. |
| Kromatografia e kolonës | Tamponi i larjes është faza e lëvizshme e kromatografisë së kolonës. |
| Mekanizmat e përdorur për ndarje | |
| Kromatografi në letër | Kromatografia në letër bazohet në thithjen e lëngjeve të ngurta. |
| Kromatografia me shtresë të hollë | Kromatografia me shtresë të hollë bazohet në përthithjen e lëngut të ngurtë. |
| Kromatografia e kolonës | Kromatografia e kolonës bazohet në përjashtimin e madhësisë, ngarkesës dhe formës. |
| Elution Buffer | |
| Kromatografi në letër | Nuk kërkohet nga kromatografia në letër. |
| Kromatografia me shtresë të hollë | Nuk kërkohet për kromatografinë me shtresë të hollë. |
| Kromatografia e kolonës | Kërkohet në kromatografinë e kolonës. |
| Zbulim | |
| Kromatografi në letër | Ngjyrosje dhe duke përcaktuar faktorin e mbajtjes. |
| Kromatografia me shtresë të hollë | Ngjyrosje dhe duke përcaktuar faktorin e mbajtjes. |
| Kromatografia e kolonës | Përcaktimi spektrofotometrik. |
Përmbledhje – Shtresa e hollë letre kundrejt kromatografisë kolone
Kromatografia në letër, TLC dhe kromatografia e kolonës janë teknika të ndarjes që përdoren për të ndarë biomolekulat si proteinat, aminoacidet dhe karbohidratet (kryesisht monosakaride). Kromatografia e letrës përdor një letër celuloze si fazë stacionare dhe mekanizmi i ndarjes bazohet në adsorbimin e lëngshëm të ngurtë. TLC gjithashtu përdor mekanizma të adsorbimit të lëngshëm të ngurtë. Molekulat ndahen në fazën stacionare, në varësi të tretshmërisë së tyre në fazën e lëvizshme. Kromatografia e kolonës përdor vetitë fizike si madhësia, forma, ngarkesa dhe pesha molekulare e përbërjes për t'u ndarë. Kolona e mbushur me materialin e matricës vepron si fazë stacionare, ndërsa buferi i larjes vepron si faza e tretësit. Ky është ndryshimi midis një shtrese të hollë letre dhe kromatografisë kolone.
