Dallimi kryesor – T4 vs T7 ADN Ligaza
Ligaza e ADN-së është një enzimë e rëndësishme që përdoret në teknikat e biologjisë molekulare. Ajo funksionon si një ngjitës molekular për të bashkuar nukleotidet duke formuar lidhje fosfodiesterike midis nukleotideve. Lidhjet fosfodiesterike formohen midis skajit 3' hidroksil të pjesës së sheqerit dhe grupit fundor 5' të fosfatit. Ligaza e ADN-së është jetike në procesin e replikimit për t'u bashkuar me fragmentet Okazaki të vargut të mbetur dhe gjatë mekanizmave të riparimit të ADN-së dhe eksperimenteve të klonimit in vitro për të bashkuar gjenin e dëshiruar me interes me gjenomën e vektorit. Ekzistojnë dy ligaza kryesore të ADN-së që përdoren aktualisht nga biologët molekularë: T4 dhe T7 ligazat e ADN-së. T4 ADN-ligaza është një nga enzimat e para që është izoluar nga bakteriofagu T4. T7 ADN ligaza, e cila është një proteinë më e vogël, është një enzimë e izoluar nga bakteriofagu T7. Ky është ndryshimi kryesor midis ligazave të ADN-së T4 dhe T7.
Cili është veprimi i ADN-ligazës?
Lidhja e ADN-së ndodh në një reagim me tre hapa. Hapi i parë është një sulm nukleofilik në alfa-fosforin e ATP-së, duke gjeneruar një ndërmjetës kovalent enzimë-adenilate, në të cilin AMP lidhet me azotin terminal anësor të lizinës. Në hapin e dytë, një sulm nukleofilik ndodh në fosforin e enzimës-adenilate nga substrati i ADN-së i përfunduar me 5'-fosfat, duke çliruar lizinën dhe duke formuar ADN-adenilate. Në hapin e fundit, ADN-adenilati sulmohet nga 3'- OH i një vargu tjetër të ADN-së, duke çliruar AMP dhe duke bashkuar polinukleotidet.
Çfarë është T4 ADN Ligaza?
T4 Ligaza ishte ligaza e parë që u izolua dhe u identifikua nga Meselson, Weigle dhe Kellenberger dhe ishte ligaza e parë komerciale e prodhuar ndonjëherë. T4 ADN-ligaza është një enzimë e varur nga ATP e cila katalizon formimin e lidhjes fosfodiesterike. Është një zinxhir i vetëm polipeptid me 487 mbetje aminoacide dhe ka një peshë molekulare prej rreth 77 kDa. PH optimale për aktivitetin e tij qëndron në intervalin 7,5 – 8.
Figura 01: T4 ADN Ligaza
T4 ADN Ligaza, siç sugjeron emri i saj, është e pranishme në bakteriofagun T4 dhe u izolua kur fagu prodhoi enzimën pas infeksionit me E. coli. Enzima lidh duplekset e dyfishtë të ADN-së me skajet e hapura dhe fragmentet që do të lidhen duhet të jenë në afërsi me njëri-tjetrin.
Çfarë është T7 ADN Ligaza?
Ligaza T7 është proteinë 41 kDa e prodhuar nga bakteriofagu T7 dhe izolohet duke infektuar qelizat E. coli. Funksioni kryesor i ligazës T7 është të lidhë duplekset e ADN-së përmes lidhjeve fosfodiesterike dhe të bashkojë fragmentet e afërta të ADN-së gjatë eksperimenteve të klonimit. PH optimale për T7 ADN-ligazën është në intervalin 7.0 – 7.2. Ligaza T7 është e varur nga ATP. Ligazat e ADN-së T7 janë gjithashtu të afta të pjekin hibridet e ADN-së dhe ARN-së, duke shkaktuar konformacione jonormale gjatë transkriptimit; megjithatë, ky fenomen është ende në kërkim nga studimet in vitro.
Cilat janë ngjashmëritë midis T4 dhe T7 ADN Ligase?
- T4 dhe T7 ADN Ligaza marrin pjesë në një reaksion të lidhjes duke pjekur duplekset e ADN-së përmes formimit të lidhjes fosfodiesterike midis skajit 3' OH dhe skajit 5' fosfat të fragmentit të ADN-së.
- Të dyja enzimat lidhin duplekset e ADN-së me fund të hapur, të cilat janë në afërsi me njëri-tjetrin.
- Të dyja enzimat janë të varura nga ATP.
- Këto enzima izolohen duke infektuar qelizat E. coli me bakteriofagun e veçantë.
- Zbatimet e të dy enzimave përfshijnë:
- Klonimi molekular – për të lidhur gjenin me interes me vektorin
- Riparim i ADN-së – për të riparuar kamare të dyfishta
- Replikimi in vitro i ADN-së
- Reaksioni zinxhir i ligazës
Cili është ndryshimi midis T4 dhe T7 ADN Ligazës?
T4 vs T7 ADN Ligaza |
|
| T4 Lloji i ADN-së ligaze i ADN-ligazës i izoluar nga bakteriofagu T4 dhe është i përfshirë në lidhjen e fragmenteve të ADN-së ngjitur nëpërmjet formimit të lidhjes fosfodiesterike. | T7 Lloji i ADN-së ligaze i ADN-ligazës i izoluar nga bakteriofagu T7 dhe është i përfshirë në lidhjen e fragmenteve ngjitur të ADN-së nëpërmjet formimit të lidhjes fosfodiesterike. |
| Madhësia e proteinës | |
| Madhësia e ligazës së ADN-së T4 është 77 kDa - më e madhe në krahasim me ligazën e ADN-së T7. | Madhësia e T7 ADN-ligazës është 41 kDa. |
| pH optimale | |
| diapazoni i pH që funksionon T4 ADN-ligaza është 7,5 – 8,0. | diapazoni i pH që funksionon T7 ADN-ligaza është 7.0 – 7.2. |
Përmbledhje – T4 vs T7 ADN Ligaza
Ligazat e ADN-së janë një klasë e rëndësishme e enzimave të përfshira në klonimin molekular për të prodhuar molekula rekombinante të ADN-së që përmbajnë gjenin e interesit. Reaksioni i lidhjes është një reagim i përdorimit të energjisë dhe ka studime të reja kërkimore që po zhvillohen për të përmirësuar saktësinë përmes modulimit të ligazave të disponueshme. Ligazat e ADN-së T4 dhe T7 janë dy lloje të enzimave të rëndësishme të ligazës së ADN-së që përdoren në teknikat biologjike molekulare. T7 ADN-ligaza është gjithashtu rezultat i hulumtimit i cili u bazua në ligazën primare të izoluar nga E. coli i infektuar me T4. T7 është portretizuar më shumë efikasitet dhe saktësi në kryerjen e funksionit të tij për shkak të madhësisë së tij më të vogël. Ky është ndryshimi midis ligazës T4 dhe T7.
Shkarko versionin PDF të T4 vs T7 DNA Ligase
Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimeve të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Diferenca midis T4 dhe T7 Ligase.
