Dallimi kryesor midis Elisa dhe Elispot është se Elisa është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që përcakton përqendrimin total të proteinave sinjalizuese të sekretuara, ndërsa Elispot është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që zbulon qelizat individuale sekretuese të citokinës..
Elisa dhe Elispot janë dy analiza imunosorbente të lidhura me enzimat që përdoren gjerësisht në mjekësi, patologji bimore, bioteknologji dhe industri të ndryshme farmaceutike. Në këto teknika, një analit proteinik zbulohet nga një antitrup i drejtuar kundër tij. Elisa është analiza më e popullarizuar e imunosorbentit e lidhur me enzimën e përdorur në laboratorë. Nga ana tjetër, Elispot është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që nuk përdoret në vend të Elisa-s, por përdoret përveç Elisa-s në laboratorë.
Çfarë është Elisa Assay?
Elisa është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që përcakton përqendrimin total të proteinave sinjalizuese të sekretuara. Është një analizë biokimike analitike e përdorur gjerësisht që u përshkrua për herë të parë nga Engvall dhe Perlmann në 1971. Kjo teknikë përdor një lloj të fazës së ngurtë të analizës së enzimës për të zbuluar praninë e një proteine specifike në një mostër të lëngshme duke përdorur antitrupa të drejtuar kundër kësaj proteine specifike. Kjo analizë është një mjet diagnostikues i përdorur zakonisht në mjekësi, patologji bimore dhe bioteknologji.
Mekanizmi i Testit ELISA
Në pjesën më të madhe të testit ELISA, një sasi e panjohur antigjeni është imobilizuar në një mbështetje të fortë (pllakë mikrolitri) në fillim. Pastaj antitrupi primar që përputhet aplikohet mbi sipërfaqen e ngurtë mbështetëse. Ky antitrup formon një kompleks me antigjenin (kompleks antigjen-antitrup). Antitrupi primar i lidhur me antigjenin mund të zbulohet nga një antitrup dytësor që është i lidhur me një enzimë përmes biokonjugimit. Në hapin e fundit të testit Elisa, shtohet një substancë që përmban substratin e enzimës. Nëse ekziston një lidhje e duhur e një antitrupi primar me antigjenin, një ndryshim i dallueshëm i ngjyrës prodhohet nga substrati. Në fund të fundit, kjo përcakton sasinë e antigjenit në mostër.
Figura 01: Lloje të ndryshme të Elisa
Për më tepër, ka qasje të ndryshme për Elizën, si Elisa direkte dhe Elisa indirekte. Aktualisht, teste të ndryshme Elisa përdoren për të zbuluar patogjenët njerëzorë si Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virusi i hepatitit B, virusi i hepatitit C, E.coli që prodhon enterotoksina, HIV dhe SARS-CoV-2.
Çfarë është Elispot Assay?
Elispot është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që zbulon qelizat individuale sekretuese të citokinës. Cecil Czerkinsky përshkroi për herë të parë ELISpot në 1983. Është një lloj analize që fokusohet në matjen sasiore të frekuencës së sekretimit të citokinës për një qelizë të vetme. Gjithashtu klasifikohet si një teknikë që përdor antitrupa për të zbuluar një proteinë analite biologjike ose kimike. Analiza e fluorospotit është një variant i analizës Elispot, e cila përdor fluoreshencën për të analizuar shumë analite (proteina më sekrete).
Mekanizmi i Testit Elispot
Në këtë mekanizëm, antitrupat monoklonalë specifikë të citokinës shtohen fillimisht në puset e pllakave mikrolitra. Pastaj qelizat e dëshiruara që vëzhgohen shtohen në puse. Më vonë, qelizat inkubohen. Gjatë inkubacionit qelizor, qelizat lejohen të reagojnë ndaj çdo stimuli dhe të sekretojnë citokinë. Citokinat që janë sekretuar nga qelizat e inkubuara do të lidhen me antitrupat pasi qelizat janë të rrethuara nga antitrupa monoklonalë specifikë për citokinë.
Figura 02: Analiza Elispot
Për të zbuluar këto antitrupa monoklonalë specifikë të citokinës, në pus shtohen antitrupa të zbulimit specifik të biotiniluar. Antitrupat e zbulimit specifik të biotiniluar kapin antitrupat monoklonalë specifikë të citokinës në puse. Për më tepër, konjugatet streptavidin-enzimë shtohen në puset për t'u lidhur me antitrupat e zbulimit. Në hapin e fundit, në puse shtohen nënshtresa specifike. Reaksionet e konjugatave dhe substrateve enzimë prodhojnë pika të dallueshme në puse. Këto pika të dallueshme lexohen në një lexues të automatizuar ELISpot. Në fund të fundit, kjo do të llogarisë më tej frekuencën e sekretimit të citokinës.
Cilat janë ngjashmëritë midis Elisa dhe Elispot?
- Ato të dyja janë analiza imunosorbente të lidhura me enzimën.
- Të dyja analizat zbulojnë analitet specifike të proteinave.
- Këto analiza përdorin antitrupa specifikë për të identifikuar analitet e proteinave.
- Të dyja analizat përdorin enzima dhe substrate.
- Ato përdoren si një mjet diagnostikues në laboratorët mjekësorë.
Cili është ndryshimi midis Elisa dhe Elispot?
Elisa është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që përcakton përqendrimin total të proteinave sinjalizuese të sekretuara. Nga ana tjetër, Elispot është një analizë imunosorbente e lidhur me enzimën që mat qelizat individuale sekretuese të citokinës. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis Elisa dhe Elispot. Për më tepër, në testin Elisa, antigjeni fillimisht imobilizohet në puset e mikrolitrit. Në të kundërt, në testin Elispot, antitrupi fillimisht imobilizohet në puset e mikrolitrit. Kështu, ky është një tjetër ndryshim midis Elisa dhe Elispot.
Infografia e mëposhtme paraqet një analizë të detajuar të ndryshimit midis Elisa dhe Elispot në formë tabelare.
Përmbledhje – Elisa vs Elispot
Elisa dhe Elispot janë dy analiza imunosorbente të lidhura me enzimat që përdoren gjerësisht në mjekësi, patologji bimore, bioteknologji dhe industri të ndryshme farmaceutike. Elisa zbulon praninë e një ligandi (proteine) në një mostër të lëngshme duke përdorur antitrupa të drejtuar kundër ligandit që do të matet. Analiza Elispot është një metodë e përdorur gjerësisht për monitorimin e përgjigjeve imune. Ai zbulon qelizat individuale sekretuese të citokinës duke përdorur antitrupa. Është një teknikë e imuno-analizimit dhe bio-analizimit. Kështu, kjo është përmbledhja e ndryshimit midis Elisa dhe Elispot.
