Dallimi kryesor midis përkthimit të nofkës dhe mbushjes së fundit është se përkthimi i nofkës është një proces që krijon sonda të etiketuara të ADN-së për reaksione të ndryshme hibridizimi, ndërsa mbushja fundore është një teknikë që krijon fragmente të zbehta duke shtuar nukleotide në mbikalime me një fije floku.
Përkthimi i nofkës dhe mbushja e fundit janë dy teknika të përdorura në biologjinë molekulare. Nick translation përdoret për etiketimin e sondave për hibridizim në mënyrë që të zbulohen sekuenca specifike nukleotide. Mbushja fundore përdoret për të bërë fragmente të bluara që kishin skaje ngjitëse me mbingarkesa me një fije floku. Të dyja teknikat kanë një rëndësi të madhe dhe ato kryhen në mënyrë rutinore në laboratorët e kërkimit molekular.
Çfarë është Nick Translation?
Nick translation është një teknikë e rëndësishme që përdoret për përgatitjen e sondave të etiketuara për teknika të ndryshme biologjike molekulare si blotting, hibridizimi in situ, hibridizimi fluoreshent in situ, etj. Është një metodë in vitro e etiketimit të ADN-së. Sondat e ADN-së përdoren për të identifikuar sekuenca specifike të ADN-së ose ARN-së. Me ndihmën e një sondë të etiketuar, fragmente specifike mund të shënohen ose vizualizohen nga një përzierje komplekse e acidit nukleik. Prandaj sondat e etiketuara përgatiten duke përdorur teknika të ndryshme. Nick translation është një metodë e tillë që prodhon sonda të etiketuara me ndihmën e enzimave DNase 1 dhe ADN polimeraza 1.
Figura 01: Nick Translation
Procesi i përkthimit të Nick fillon me aktivitetin e enzimës DNase 1. DNase 1 prezanton nyjet në shtyllën kurrizore të fosfatit të ADN-së me dy zinxhirë duke shkëputur lidhjet fosfodiesterike midis nukleotideve. Pasi të krijohet nofka, do të prodhohet grupi i lirë 3' OH i nukleotidit dhe enzima e ADN polimerazës 1 do të veprojë mbi të. Aktiviteti i ekzonukleazës 5' deri në 3' i ADN polimerazës 1 heq nukleotidet nga gryka drejt drejtimit 3' të vargut të ADN-së.
Njëkohësisht, aktiviteti i polimerazës i enzimës së ADN polimerazës 1 funksionon dhe shton nukleotide për të zëvendësuar nukleotidet e hequra. Nëse nukleotidet janë të etiketuara, zëvendësimi do të ndodhë nga nukleotidet e etiketuara dhe do të shënojë ADN-në për identifikim. Së fundi, kjo ADN e etiketuar e saposintetizuar mund të përdoret si sonda në reaksione të ndryshme hibridizimi.
Çfarë është Mbushja e Fundit?
Mbushja fundore është një teknikë e përdorur në biologjinë molekulare për të bërë fragmente të bluara. Tretja e kufizuar prodhon fragmente me mbingarkesa. Këto fragmente mund të mos jenë të pajtueshme për t'u lidhur në vektorët plazmidë. Vektorët shpesh zbehen për të lejuar bashkimin e skajeve të papajtueshme. Prandaj, fragmentet me mbingarkesa mund të zbehen duke shtuar nukleotidet në vargun plotësues duke përdorur mbingarkimin si shabllon për polimerizim. Ky proces njihet si mbushja fundore.
Polimerazat e ADN-së si fragmenti Klenow i ADN Polimerazës I dhe T4 ADN Polimeraza katalizojnë mbushjen fundore. Ata shtojnë nukleotide për të mbushur (5' → 3') dhe për të përtypur (3' → 5'). Pasi skajet ngjitëse të mbushen, ato bëhen të hapura dhe janë gati për t'u lidhur në një vektor.
Për më tepër, mbushja fundore mund të përdoret për të etiketuar molekulat e ADN-së. Megjithatë, mund të përdoret vetëm për të etiketuar molekulat e ADN-së me skaje ngjitëse. Në krahasim me përkthimin e nofkës, mbushja e fundit është një metodë më e butë që rrallë shkakton thyerje të ADN-së.
Cilat janë ngjashmëritë midis Nick Translation dhe End Filling?
- Edhe përkthimi i nofkës dhe mbushja e fundit janë teknika biologjike molekulare.
- Mund të përdoren për të etiketuar sondat.
- Të dyja janë in vitro
Cili është ndryshimi midis Nick Translation dhe End Filling?
Përkthimi me nick është një teknikë që krijon sonda të etiketuara për hibridizim. Në të kundërt, mbushja fundore është një teknikë që krijon fragmente të hapura për lidhjen në vektorë. Pra, ky është ndryshimi kryesor midis përkthimit të nofkës dhe mbushjes së fundit. Për më tepër, përkthimi i Nick kërkon përdorimin e aktivitetit të ekzonukleazës 5' deri në 3' ndërsa mbushja fundore nuk kërkon aktivitetin e ekzonukleazës 5' deri në 3'.
Infografiku i mëposhtëm paraqet në mënyrë më të detajuar ndryshimet midis përkthimit të pseudonimit dhe plotësimit të fundit.
Përmbledhje – Nick Translation vs Fund Filling
Përkthimi i Nick është një metodë që përfshin nukleotide të etiketuara me radio në ADN. Ai sintetizon sondat e etiketuara bazuar në aktivitetet e enzimave të DNase 1 dhe E. coli ADN polimeraza 1. Mbushja fundore, nga ana tjetër, është një teknikë që prodhon fragmente të mprehta. Kur fragmentet kanë skaje ngjitëse (mbikalime me një fije), është e nevojshme që ato të bëhen skaje të bluara në mënyrë që të lidhen në vektorë. Mbushja fundore shton nukleotide të pajtueshme dhe krijon fragmente fundore të topitura në mënyrë që t'i bëjë ato të pajtueshme për lidhje. Kështu, kjo përmbledh ndryshimin midis përkthimit të nofkës dhe mbushjes së fundit.
