Dallimi kryesor – Phusion vs Taq Polimeraza
Polimerazat e ADN-së janë enzima të përdorura gjerësisht në teknikat e biologjisë molekulare dhe janë gjithashtu të pranishme natyrshëm në të gjithë organizmat që i nënshtrohen replikimit të ADN-së. Ato janë enzimat kryesore polimerizuese që përfshihen gjatë riprodhimit. ADN polimeraza është e aftë të shtojë nukleotide në skajin e lirë 3' të vargut të ADN-së duke shkaktuar kështu shtrirjen e një vargu të ri. Aktualisht, për shkak të zhvillimeve të biologjisë molekulare në diagnostikimin e sëmundjeve dhe aplikimet industriale, është e rëndësishme të prodhohen polimeraza me veti të ndryshme të dobishme. Kjo rrit saktësinë e metodës dhe e bën atë një teknikë më të shpejtë. Phusion dhe Taq polimeraza janë dy enzima të polimerazës termostabile të prodhuara në treg, të cilat përdoren në aplikime të veçanta molekulare. Phusion është një polimerazë e ADN-së e izoluar nga Pyrococcus furiosus dhe përdoret kryesisht në eksperimentet e klonimit për të rritur besnikërinë. Taq ADN Polimeraza është polimeraza standarde e ADN-së e përdorur në Reaksionin Zinxhiri të Polimerazës (PCR), dhe është e izoluar nga bakteri i qëndrueshëm termik; Thermus aquaticus. Dallimi kryesor midis dy enzimave është mikroorganizmi burimor. Phusion është i izoluar nga ekstremofili, Pyrococcus furiosus, ndërsa polimeraza Taq është e izoluar nga termofili, Thermus aquaticus.
Çfarë është Phusion?
Phusion ADN polimeraza është një polimerazë e re që prodhohet duke izoluar enzimën nga Pyrococcus furiosus, i cili është një Archaea ekstremofilike. Këto mikrobe qëndrojnë në kushte jashtëzakonisht të larta të temperaturës, duke e bërë kështu polimerazën një polimerazë shumë të qëndrueshme ndaj nxehtësisë. Phusion polimeraza përdoret për të marrë besnikëri ekstreme ndaj polimerazës konvencionale të qëndrueshme termike; Taq polimeraza. Phusion polimeraza është në gjendje të amplifikojë shabllone të gjata deri në 7,5 kb të ADN gjenomike. Kapaciteti optimal i polimerizimit të Phusion polimerazës është në 720 C. Phusion përdoret gjithashtu në produktet e klonimit për sekuencën, analizën e shprehjes dhe analizën e mutacioneve.
Phusion ADN polimeraza ka aktivitetin 3’ – 5’ ekzonukleazë. Kjo lejon korrigjimin e vargut të saposintetizuar pas sintezës. Prandaj, mospërputhjet e nukleotideve riparohen lehtësisht. Kështu, ai ka një shkallë më të vogël gabimi. Përparësitë e përgjithshme të Phusion polimerazës janë;
- Besnikëri ekstreme
- Shpejtësia e lartë dhe koha e reduktuar e zgjatjes
- Reagime të fuqishme dhe kërkon optimizim minimal
- Rendiment i lartë
Figura 01: Puzioni
Disavantazhi kryesor i Phusion polimerazës është se frenohet në prani të deoksiuridin trifosfatit (dUTP). Kur dUTP-të grumbullohen në përzierjen e reaksionit, ai mund të pengojë veprimet e polimerazës Phusion. Kjo parandalohet duke trajtuar përzierjen e reaksionit me dUTPase përpara se të shtohet enzima. Aktualisht, një variant rezistent ndaj dUTP i Phusion polimerazës i njohur si Pfu Turbo përdoret në vend të Phusion polimerazës si një ilaç për këtë problem.
Çfarë është Taq Polimeraza?
Shpikja e polimerazës së ADN-së Taq ka revolucionarizuar fushën e biologjisë molekulare. Ai zgjidhi një problem të madh në amplifikimin e ADN-së. Taq ADN polimeraza është një enzimë polimerazë e qëndrueshme ndaj nxehtësisë e nxjerrë dhe e izoluar nga bakteri termofilik, Thermus aquaticus. Zbulimi i kësaj enzime çon në zhvillimin e PCR. Kjo enzimë ka lejuar përdorimin e reaksionit zinxhir polimerazë në amplifikimin e ADN-së në vend të teknikave konvencionale të mundimshme të klonimit. PCR tani përdoret në diagnostikimin molekular, në fushat bujqësore dhe industriale me shumë variacione të reja të shtuara në teknikë.
Figura 02: Taq Polimeraza
Taq ADN polimeraza funksionon në intervalin optimal të temperaturës midis 720C – 800C. Taq ADN polimeraza kërkon një bashkëfaktor; magnezi për funksionin e tij. Taq polimeraza nuk ka aftësinë korrigjuese 3' – 5', prandaj, shkalla e gabimit të Taq ADN polimerazës është e lartë në krahasim me llojet më të reja të polimerazës së ADN-së si Phusion polimeraza etj. Por, popullariteti i Taq ADN polimerazës mbetet e njëjta gjë në të gjithë botën e shkencës për shkak të komoditetit dhe fleksibilitetit të enzimës.
Cilat janë ngjashmëritë midis Phusion dhe Taq polimerazës?
- Edhe enzimat e polimerazës Phusion dhe Taq janë enzima polimerizuese që janë të afta të shtojnë nukleotide në skajin 3' të lirë të vargut të ADN-së.
- Si polimerazat Phusion dhe Taq kërkojnë një sekuencë primer për të filluar polimerizimin.
- Të dy polimerazat Phusion dhe Taq janë të qëndrueshme ndaj nxehtësisë.
- Të dy polimerazat Phusion dhe Taq përdoren në mekanizmat PCR për të amplifikuar ADN-në.
- Kur shtohet polimeraza në përzierjen e reaksionit, të dyja polimerazat Phusion dhe Taq shtohen të fundit për të siguruar efikasitetin e enzimës.
- Të dy polimerazat Phusion dhe Taq sintetizohen komercialisht për qëllime eksperimentale të biologjisë molekulare.
- Si polimerazat Phusion dhe Taq kërkojnë një kofaktor për të përfunduar funksionin e tij.
Cili është ndryshimi midis Phusion dhe Taq Polimerazës?
Phusion vs Taq Polimeraza |
|
| Phusion është një polimerazë e ADN-së e izoluar nga Pyrococcus furiosus dhe përdoret kryesisht në eksperimentet e klonimit për të rritur besnikërinë. | Taq ADN Polimeraza është polimeraza standarde e ADN-së e përdorur në Reaksionin Zinxhiri të Polimerazës (PCR) dhe është e izoluar nga bakteri i qëndrueshëm termik, Thermus aquaticus. |
| Organizmi burimor | |
| Phusion është nxjerrë nga arkea ekstremofile - Pyrococcus furiosus. | Këto vepra letrare shtrihen nga periudha e kolonizimit deri në periudhën e dekolonizimit. |
| Aftësia për të lexuar prova | |
| 3' – 5' aftësia e leximit provë është e pranishme në Phusion. | 3' - Aftësia e leximit të provës 5' mungon në polimerazën Taq. |
| Besnikëri | |
| Besnikëri e lartë është atje me Phusion. | Taq polimeraza tregon besnikëri të ulët. |
| Amplifikimi | |
| Phusion është i aftë të amplifikojë fragmente të gjata të ADN-së. | Taq polimeraza është në gjendje të përforcojë fragmente shumë më të shkurtra të ADN-së. |
| dUTP Helmimi | |
| Veprimi i phusionit pengohet nga koeficienti i akumulimit. | Taq polimeraza nuk frenohet nga dUPT. |
Përmbledhje – Phusion kundër polimerazës Taq
Phusion dhe Taq ADN polimeraza janë dy polimeraza të qëndrueshme ndaj nxehtësisë që përdoren në teknikat PCR. Phusion është një polimerazë e izoluar nga ekstremofili, Pyrococcus furiosus ndërsa, Taq është i izoluar nga bakteret termostabël Thermus aquaticus. Zbulimi i Taq ADN polimerazës çon në shpikjen e PCR. Phusion ka shumë përparësi ndaj Taq, gjë që e ka bërë Phusion një opsion më të mirë në prodhimin e ADN-së me besnikëri të lartë. Megjithatë, Taq polimeraza përdoret ende si enzima standarde e polimerazës në PCR. Ky është ndryshimi midis Phusion dhe Taq polimerazës.
