Diferenca kryesore – Elektroforezë xhel horizontale kundër vertikale
Elektroforeza me xhel është një teknikë laboratorike e përdorur në gjenetikë për të ndarë përzierjet që përmbajnë ADN, ARN dhe proteina të tjera sipas ngarkesës dhe madhësisë molekulare të tyre përkatëse. ADN, ARN ose proteinat që duhet të ndahen në këtë metodë kalohen përmes një xhel që përmban pore të vogla. Molekulat drejtohen përmes xhelit nga një fushë elektrike. Molekulat kalojnë nëpër poret e xhelit dhe shpejtësia e lëvizjes është në përpjesëtim të zhdrejtë me gjatësinë e tyre përkatëse. Prandaj, molekulat me madhësi molekulare më të ulët do të lëvizin më shpejt se molekulat me peshë molekulare më të lartë. Fusha elektrike krijohet nga diferenca në ngarkesë në dy skajet e xhelit. Njëra skaj përmban një ngarkesë pozitive, dhe skaji tjetër përmban një ngarkesë negative. Meqenëse molekulat e ADN-së dhe ARN-së janë të ngarkuara negativisht, ato do të tërhiqen drejt skajit të ngarkuar pozitivisht të xhelit. Elektroforeza me xhel mund të jetë e dy metodave të ndryshme: elektroforeza horizontale me xhel dhe elektroforeza vertikale me xhel. Në elektroforezën horizontale të xhelit, xheli është i pranishëm në një orientim horizontal dhe zhytet në një tampon të vazhdueshëm që funksionon, i cili është i pranishëm brenda vetë kutisë së xhelit. Në elektroforezën vertikale me xhel, sistemi bufer është i orientuar vertikalisht dhe është i ndërprerë me dy dhoma të pranishme në krye dhe në fund me një katodë dhe një anodë, përkatësisht. Ky është ndryshimi kryesor midis elektroforezës horizontale dhe vertikale me xhel.
Çfarë është Elektroforeza Horizontale Xhel?
Elektroforeza horizontale e xhelit përdor teorinë bazë për ndarjen e molekulave të ADN-së, ARN-së ose proteinave sipas madhësisë dhe ngarkesës së tyre molekulare përkatëse. Në këtë teknikë, xheli është i pranishëm në një orientim horizontal dhe zhytet në një tampon i cili është i vazhdueshëm. Xhel agarozë përdoret për të ndarë kutinë e xhelit në dy ndarje. Një skaj i kutisë së xhelit përmban një anodë ndërsa skaji tjetër përmban një katodë. Kur aplikohet një rrymë, buferi i përdorur në këtë teknikë lejon krijimin e një gradienti ngarkese. Kur aplikohet ngarkesa, xheli tenton të nxehet. Tampon funksionon gjithashtu si ftohës, i cili ruan temperaturën në nivelet optimale. Riqarkullimi i tamponit të rrjedhshëm parandalon formimin e një gradienti pH. Një sistem buferi i ndërprerë nuk mund të përdoret në elektroforezën horizontale të xhelit pasi që dy ndarjet e sistemit të xhelit lidhen me tamponin që funksionon. Akrilamidi përdoret gjatë elektroforezës së xhelit për të ndarë përzierjet e proteinave.
Figura 01: Elektroforeza horizontale me xhel
Në elektroforezën horizontale të xhelit, akrilamidi nuk mund të përdoret pasi kutia e xhelit është e ekspozuar ndaj oksigjenit. Për shkak të pranisë së oksigjenit, polimerizimi i akrilamidit pengohet dhe kjo ndërhyn në formimin e xhelit. Elektroforeza horizontale me xhel është një metodë e lehtë që përdoret në ndarjen e ADN-së dhe ARN-së.
Çfarë është Elektroforeza Vertical Gel?
Teknika vertikale e elektroforezës me xhel funksionon sipas teorisë parësore të elektroforezës me xhel, por konsiderohet të jetë më komplekse se metoda e elektroforezës me xhel horizontal. Kjo teknikë përdor një tampon të ndërprerë. Një katodë është e vendosur në dhomën e sipërme, dhe anoda ndodhet në dhomën e poshtme. Elektrodat e pranishme në çdo ndarje sigurojnë fushën e nevojshme elektrike. Një shtresë e hollë xheli derdhet midis dy pllakave prej xhami të montuara. Prandaj, pjesa e sipërme e xhelit zhytet në dhomën e sipërme dhe pjesa e poshtme e xhelit zhytet në dhomën në fund. Pasi të aplikohet rryma, një pjesë e vogël e tamponit lëviz në dhomën e poshtme nga dhoma e sipërme përmes xhelit. Rryma e aplikuar në këtë teknikë është e njësive minutë.
Figura 02: Elektroforeza vertikale me xhel
Në elektroforezën vertikale të xhelit, buferi rrjedh vetëm përmes xhelit. Kjo lejon kontroll të saktë të gradientit të tensionit gjatë fazës së ndarjes. Xhel akrilamid mund të përdoret pasi ndarjet nuk janë të ekspozuara ndaj oksigjenit atmosferik. Për shkak të madhësisë më të vogël të poreve të xhelit akrilamid, ndarja e saktë mund të arrihet me një rezolucion më të lartë.
Cilat janë ngjashmëritë midis elektroforezës horizontale dhe vertikale me xhel?
- Të dy sistemet funksionojnë sipas teorisë bazë të elektroforezës së xhelit.
- Anoda dhe katoda përdoren për të siguruar fushën e nevojshme elektrike në të dy sistemet.
Cili është ndryshimi midis elektroforezës horizontale dhe vertikale me xhel?
Elektroforezë xhel horizontale kundër vertikale |
|
| Elektroforeza horizontale me xhel është një teknikë e elektroforezës me xhel në të cilën xheli është i pranishëm në një orientim horizontal. | Elektroforeza vertikale me xhel është një teknikë e elektroforezës me xhel në të cilën xheli orientohet vertikalisht. |
| Buffer | |
| Elektroforeza horizontale me xhel përbëhet nga një tampon i vazhdueshëm. | Tamponi i funksionimit është i ndërprerë në elektroforezën vertikale me xhel. |
| Përdorimi i akrilamidit | |
| Akrilamidi nuk mund të përdoret për elektroforezën horizontale të xhelit pasi kutia e xhelit është e ekspozuar ndaj oksigjenit atmosferik. | Meqenëse xheli nuk është i ekspozuar ndaj oksigjenit atmosferik për shkak të dy dhomave të veçanta, akrilamidi mund të përdoret për elektroforezën vertikale të xhelit. |
| Funksion | |
| Elektroforeza horizontale me xhel përdoret më shpesh për ndarjen e përzierjeve të ADN-së dhe ARN-së, por jo proteinave. | Elektroforeza vertikale me xhel përdoret për të ndarë përzierjet e proteinave. |
Përmbledhje – Elektroforezë xhel horizontale kundër vertikale
Elektroforeza me xhel është teknikë laboratorike që përdoret gjerësisht në ndarjen e përzierjeve që përmbajnë molekula të ADN-së, ARN-së dhe proteinave. Ekzistojnë dy metoda të elektroforezës me xhel: elektroforeza me xhel horizontale dhe vertikale. Në elektroforezën horizontale me xhel, tamponi i rrjedhjes është i vazhdueshëm, ndërsa në elektroforezën vertikale me xhel, është i ndërprerë. Ky është ndryshimi midis elektroforezës horizontale dhe vertikale të xhelit. Të dy sistemet funksionojnë sipas parimit të përbashkët të elektroforezës me xhel.
Shkarko Versionin PDF të Elektroforezës Horizontal vs Vertical Gel
Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimit të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Dallimi midis elektroforezës xhel horizontale dhe vertikale.
