Dallimi kryesor – ELISA direkte kundër indirekte
Një imunoanalizëm i lidhur me enzimat (ELISA), i njohur gjithashtu si imunoassay enzimë, është një test serologjik që zbulon antitrupat në gjak. Përdoret si një mjet diagnostikues për të zbuluar nëse pacienti ka qenë i ekspozuar ndaj një lloji të caktuar virusi ose një agjenti tjetër infektiv (antigjen) dhe nëse trupi ka prodhuar antitrupa kundër infeksionit. ELISA gjithashtu mund të identifikojë infeksionet e kaluara dhe aktuale. Prandaj, ELISA përdoret shpesh si një test paraprak i ekzaminimit nga mjekët përpara analizës së thelluar të sëmundjeve. Ky test mund të kryhet në laborator duke marrë një mostër gjaku nga pacienti. Ekzistojnë dy lloje të testit ELISA: ELISA direkte dhe ELISA indirekte. Dallimi kryesor midis ELISA direkte dhe indirekte është se ELISA indirekte është më e ndjeshme dhe kërkon shtimin e një antitrupi sekondar ndërsa ELISA direkte është më pak e ndjeshme dhe përdor vetëm një antitrup primar.
Çfarë është ELISA Direct?
ELISA është një test diagnostikues i sëmundjes që kryhet për të identifikuar praninë e antigjeneve ose antitrupave të veçantë në gjak. Bëhet si analizë e pllakave. Ai përdor antitrupa të lidhur me enzima lehtësisht të analizuara. Prania e antigjeneve në kampionin e serumit lidhet me antitrupa specifikë të lidhur me enzimat. Në hapin e fundit, një substrat specifik shtohet për të reaguar me enzimën. Enzima e shndërron substratin në një produkt me ngjyrë ose që prodhon sinjal. Ndryshimi i ngjyrës në substratin kimik zbulon praninë e një antitrupi të veçantë në kampionin e serumit. Testi i drejtpërdrejtë ELISA përdor vetëm një antitrup primar të lidhur me enzimën. Pas lidhjes me antigjenin, ai ndryshon shpejt ngjyrën, duke treguar praninë e agjentit infektiv në gjak. Megjithatë, intensiteti i sinjaleve është më i dobët në ELISA direkte pasi epitopet janë të kufizuar në lidhjen e antigjeneve. Prandaj, ELISA e drejtpërdrejtë është më pak e ndjeshme në krahasim me ELISA indirekte.
Figura 01: Testi i drejtpërdrejtë ELISA
Çfarë është ELISA indirekte?
ELISA mund të kryhet duke përdorur dy lloje të antitrupave përkatësisht; antitrupi primar dhe antitrupi sekondar. Mjeti indirekt ELISA përdor të dy llojet e antitrupave për të përforcuar sinjalet për zbulim më të mirë. Teknika indirekte ELISA kryhet si më poshtë.
- Pllakat inkubohen me antigjene dhe lahen për të bllokuar lidhjen jospecifike.
- Më pas shtohen antitrupat parësorë dhe lahen.
- Antrupat sekondarë të lidhur me enzimë shtohen dhe lahen.
- Një substrat shtohet dhe lihet të reagojë me enzimat.
- Zbulohen sinjalet dhe identifikohet prania ose mungesa e antigjenit specifik në mostër.
Në testin indirekt ELISA, disa antitrupa dytësorë mund të lidhen me një antitrup të vetëm primar. Antitrupat sekondarë janë të lidhur me enzima lehtësisht të analizuara. Prandaj, një lidhje mund të japë një sinjal të fortë për shkak të më shumë se një ndërveprimesh. Prandaj, ELISA indirekte është më e ndjeshme se ELISA e drejtpërdrejtë. Megjithatë, ELISA indirekte mund të japë sinjale jospecifike për shkak të reaksioneve të kryqëzuara të antitrupave dytësorë.
Figura 02: Testi indirekt ELISA
Cili është ndryshimi midis ELISA direkte dhe indirekte?
ELISA direkte kundër indirekte |
|
| ELISA direkte është më pak e ndjeshme në krahasim me ELISA indirekte. | ELISA indirekte është më e ndjeshme. |
| Koha e marrë | |
| Testi i drejtpërdrejtë ELISA është një proces i shpejtë. | ELISA indirekte kërkon kohë. |
| Përdorimi i Antitrupave | |
| Vetëm një lloj antitrupash (antitrupat primare) përdoren në ELISA direkte. | Antrupat parësor dhe dytësor përdoren për ELISA indirekte. |
| Lidhja me enzimat | |
| Antrupat primare janë të lidhur me enzimat. | Antrupat sekondarë janë të lidhur me enzimat. |
| Reaktiviteti i kryqëzuar i antitrupave të dytë | |
| ELISA e drejtpërdrejtë eliminon reaktivitetin e kryqëzuar të antitrupave të dytë. | ELISA indirekte ndikohet nga ndër-reaktiviteti i antitrupave të dytë. |
| Sinjalet | |
| Sinjalet janë të dobëta në krahasim me ELISA indirekte. | Sinjalet përforcohen në ELISA indirekte. Prandaj, është e lehtë për t'u zbuluar. |
Përmbledhje – ELISA direkte kundër indirekte
ELISA është një teknikë biokimike e përdorur kryesisht në imunologji për të zbuluar praninë e një antitrupi ose një antigjeni në një mostër gjaku të një pacienti. Mund të kryhet nëpërmjet dy proceseve të njohura si ELISA direkte ose indirekte. Testi i drejtpërdrejtë ELISA përdor vetëm antitrupa parësorë për të zbuluar antigjenin ndërsa ELISA indirekte përdor antitrupa parësorë dhe sekondarë. Në ELISA direkte, antitrupat parësorë janë të etiketuar ndërsa në ELISA indirekte janë etiketuar antitrupat sekondarë. Ky është ndryshimi midis ELISA direkte dhe indirekte.
