Dallimi kryesor midis elektroforezës së xhelit të agarozës dhe poliakrilamidit është se elektroforeza e xhelit të agarozës përdor xhel agarozë të derdhur horizontalisht për të ndarë fragmente relativisht më të mëdha të ADN-së, ndërsa elektroforeza e xhelit të poliakrilamidit përdor xhel poliakrilamide të derdhur vertikalisht për të ndarë fragmente më të shkurtra të acidit nukleik..
Elektroforeza është një lloj teknikë që përdor një fushë elektrike të aplikuar në një matricë xhel për të ndarë biomolekulat si ADN, ARN dhe proteina. Kjo ndarje e biomolekulave të tilla si ADN, ARN dhe proteina përmes elektroforezës bazohet në ngarkesën dhe madhësinë. Mostrat ngarkohen në puset e xhelit. Më vonë, fusha elektrike aplikohet në të gjithë xhel. Fusha bën që molekulat e ngarkuara negativisht të lëvizin drejt elektrodës pozitive. Matrica e xhelit vepron si një sitë molekulare përmes së cilës molekulat më të vogla kalojnë ose udhëtojnë me shpejtësi, ndërsa molekulat më të mëdha lëvizin ngadalë. Kjo mundëson ndarjen e molekulave në bazë të ngarkesës dhe madhësisë. Prandaj, elektroforeza me xhel agarozë dhe poliakrilamide janë dy lloje të teknikave të elektroforezës së xhelit që kryesisht ndihmojnë në ndarjen e molekulave bazuar në madhësinë dhe ngarkesën e tyre.
Çfarë është Elektroforeza me Xhel Agarose?
Elektroforeza e xhelit të agarozës është një teknikë që përdor xhel agarozë për të ndarë biomolekulat si ADN dhe ARN. Është një teknikë e përdorur për të ndarë acidet nukleike kryesisht sipas madhësisë. Përbërësi kryesor i quajtur agarozë i përdorur në këtë teknikë është një polisaharid. Ajo vjen nga alga deti. Agaroza mund të tretet në tampon të vluar dhe më pas mund të hidhet në një tabaka që mbahet horizontalisht. Në tabaka, ajo ngurtësohet kur ftohet për të formuar një pllakë. Xhelet e agarozës derdhen me një krehër në vend për të krijuar puse në të cilat ngarkohen acidet nukleike si ADN ose ARN pasi xheli të jetë ngurtësuar.
Figura 01: Elektroforeza me Xhel Agarose
Xheli më vonë zhytet në një tampon të përshtatshëm dhe një rrymë aplikohet nëpër xhel. ADN-ja ka një ngarkesë negative uniforme që është e pavarur nga përbërja e sekuencës së molekulës. Prandaj, molekulat e ADN-së do të migrojnë nga katoda (-) drejt anodës (+). Shkalla e migrimit varet drejtpërdrejt nga madhësia e molekulës. Makromolekulat më të mëdha e kanë kohën më të vështirë për të lundruar nëpër xhel. Nga ana tjetër, makromolekulat më të vogla rrëshqasin nëpër xhel shpejt dhe mjaft lehtë.
Çfarë është Elektroforeza me Xhel Polyakrilamid?
Elektroforeza e xhelit të poliakrilamidit (PAGE) është një teknikë që përdor xhel poliakrilamide për të ndarë biomolekulat. Është një teknikë që përdoret gjerësisht për të ndarë makromolekulat biologjike, zakonisht proteinat dhe acidet nukleike, sipas lëvizshmërisë së tyre elektroforetike. Hidratimi i akrilonitrilit rezulton në formimin e molekulave të akrilamidit nga nitrilihidrataza. Akrilamidi është i tretshëm në ujë dhe me shtimin e iniciatorëve të radikalëve të lirë, akrilamidi polimerizohet, duke rezultuar në formimin e xhelit të poliakrilamidit. Normalisht, rritja e përqendrimeve të akrilamidit rezulton në zvogëlimin e madhësisë së poreve në xhel. Xhelët e poliakrilamideve derdhen vertikalisht, ndryshe nga xhelat e agarozës.
Figura 02: Elektroforeza me xhel poliakrilamid
Në elektroforezën e xhelit të poliakrilamidit, molekulat mund të funksionojnë në gjendjen e tyre amtare, duke ruajtur strukturën e rendit më të lartë të molekulave. Kjo metodë quhet PAGE amtare. Përndryshe, një denaturant kimik mund të shtohet gjithashtu për të hequr strukturën e rendit më të lartë dhe për ta kthyer molekulën në një molekulë të pastrukturuar lëvizshmëria e së cilës varet vetëm nga gjatësia e saj. Ky lloj quhet SDS-PAGE.
Cilat janë ngjashmëritë midis Elektroforezës së Xhelit të Agarozës dhe Polyakrilamidit?
- Elektroforeza me xhel agarozë dhe poliakrilamide janë dy lloje të teknikave të elektroforezës me xhel.
- Në fakt, ato janë teknika biologjike molekulare.
- Të dyja teknikat përdoren për të zbuluar makromolekulat biologjike si ADN-ja dhe proteinat.
- Këto teknika bëhen nga teknikë ose studiues të aftë.
- Në të dyja teknikat, ndarja e makromolekulave bazohet në ngarkesën dhe madhësinë.
- Të dyja teknikat lejojnë ndarjen e acideve nukleike si ADN dhe ARN.
Cili është ndryshimi midis elektroforezës së xhelit të agarozës dhe poliakrilamidit?
Elektroforeza e xhelit të agarozës është një teknikë që përdor xhel agarozë të derdhur horizontalisht për të ndarë biomolekulat, ndërsa elektroforeza me xhel poliakrilamid është një teknikë që përdor xhel poliakrilamide të derdhur vertikalisht për të ndarë biomolekulat. Ky është ndryshimi kryesor midis elektroforezës së xhelit të agarozës dhe poliakrilamidit. Për më tepër, elektroforeza e xhelit të agarozës përdoret për ndarjen e ADN-së dhe ARN-së, ndërsa elektroforeza e xhelit poliakrilamid përdoret për ndarjen e acideve nukleike si ADN-ja, ARN-ja ose proteinat.
Tabela e mëposhtme përmbledh ndryshimin midis elektroforezës së xhelit të agarozës dhe poliakrilamidit.
Përmbledhje – Elektroforeza e xhelit të agarozës kundër poliakrilamidit
Elektroforeza e xhelit të agarozës dhe poliakrilamidit janë dy lloje të teknikave të elektroforezës së xhelit të përdorura në laboratorët e biologjisë molekulare. Elektroforeza e xhelit të agarozës përdor një xhel agarozë për të ndarë biomolekulat. Agaroza në përgjithësi nuk është toksike për njerëzit, ndërsa poliakrilamidi është toksik për njerëzit. Për më tepër, elektroforeza e xhelit të agarozës tregon një rezolucion të ulët ndërsa elektroforeza e xhelit poliakrilamid tregon një rezolucion më të madh. Elektroforeza e xhelit të poliakrilamidit përdor një xhel poliakrilamid për të ndarë biomolekulat. Kjo përmbledh ndryshimin midis elektroforezës së xhelit të agarozës dhe poliakrilamidit
