Dallimi kryesor midis RP HPLC dhe HIC është se RP HPLC përdor një fazë më të lëvizshme polare dhe një fazë stacionare më pak polare. Ndërsa, HIC përdor një fazë stacionare hidrofobike që lejon molekulat hidrofobike të lidhen me të.
Kromatografia është një teknikë analitike që ndihmon në ndarjen e një përzierjeje në përbërësit e saj. Së pari, ne duhet të shpërndajmë kampionin që do të ndahet në një tretësirë. Kjo përzierje tretësirë-substancë quhet faza e lëvizshme. Pastaj faza e lëvizshme kalohet përmes një materiali tjetër të quajtur faza stacionare. Faza e palëvizshme përcakton ndarjen e komponentëve. Ndarja ndodh për shkak të ndarjes së materialit midis fazës së lëvizshme dhe fazës stacionare.
Çfarë është RP HPLC?
Termi RP HPLC qëndron për kromatografi të lëngshme me performancë të lartë në fazën e kundërt. Ai përfshin ndarjen e përbërësve në një përzierje, sipas hidrofobisë. Komponentët hidrofobikë në fazën e lëvizshme lidhen me ligandët hidrofobikë të imobilizuar në fazën stacionare, ndërsa përbërësit hidrofilë eluojnë përmes fazës së palëvizshme pa u ngjitur në sipërfaqen e fazës stacionare.
Figura 01: Aparati HPLC
Për më tepër, kjo metodë ka më shumë riprodhueshmëri në krahasim me teknikat e tjera kromatografike, dhe tregon gjithashtu zbatueshmëri të gjerë. Prandaj, ne e përdorim këtë metodë në laboratorë për mbi 75% të të gjitha metodave HPLC. Shumicën e kohës, ne përdorim një përzierje ujore të ujit me një tretës organik polar të përzier si fazë lëvizëse. Kështu, do të sigurojë ngjitjen e përbërësve hidrofobikë në tretësirë në sipërfaqen e fazës stacionare.
Çfarë është HIC?
Termi HIC qëndron për kromatografinë e ndërveprimit hidrofobik. Është një lloj HPLC i fazës së kundërt dhe kjo metodë përdoret kryesisht për ndarjen e biomolekulave të mëdha siç janë proteinat. Në këtë metodë, ne duhet të përdorim një medium ujor për të bërë kampionin e biomolekulës. Kjo është për shkak se tretësit organikë mund të shkaktojnë denatyrim të proteinave. Për më tepër, kjo teknikë përdor ndërveprimin midis molekulave të mëdha me një sipërfaqe paksa hidrofobike të fazës stacionare. Për më tepër, ne duhet të përdorim një përqendrim të lartë të kripës në mostër, sepse kjo inkurajon që proteina të mbahet në paketim; ky proces quhet kriposja. Duke ulur gradualisht përqendrimin e kripës, ne mund t'i bëjmë biomolekulat të eluten veçmas sipas hidrofobisë së tyre.
Zakonisht, kjo metodë përdor kushtet e kundërta me atë të kromatografisë së shkëmbimit të joneve. Në këtë teknikë, së pari, ne duhet të kalojmë një zgjidhje tampon përmes kolonës në mënyrë që të zvogëlojmë tretjen e tretësirës në mostër. Ai bën që zonat hidrofobike të proteinës të ekspozohen. Megjithatë, kur molekula është më hidrofobike, kërkohet më pak kripë për të nxitur lidhjen. Këtu, tretësirat më pak hidrofobike eluratohen së pari, dhe sipas ndryshimit të përqendrimit të kripës, më shumë tretje hidrofobike eluratohen të fundit.
Cili është ndryshimi midis RP HPLC dhe HIC?
Kromatografia është një teknikë analitike për ndarjen e përbërësve në një përzierje. RP HPLC dhe HIC janë dy teknika të specializuara kromatografike. Dallimi kryesor midis RP HPLC dhe HIC është se RP HPLC përdor një fazë më të lëvizshme polare dhe fazë stacionare më pak polare, ndërsa HIC përdor një fazë stacionare hidrofobike, e cila lejon që molekulat hidrofobike të ngjiten në të.
Infografia e mëposhtme përmbledh ndryshimin midis RP HPLC dhe HIC.
Përmbledhje – RP HPLC kundrejt HIC
Kromatografia është një teknikë analitike për ndarjen e përbërësve në një përzierje. RP HPLC dhe HIC janë dy teknika të specializuara kromatografike. Dallimi kryesor midis RP HPLC dhe HIC është se RP HPLC përdor një fazë më polare të lëvizshme dhe një fazë stacionare më pak polare, ndërsa HIC përdor një fazë stacionare hidrofobike, e cila lejon që molekulat hidrofobike të lidhen me të.
