Dallimi kryesor – Hibridizimi në vend kundrejt imunohistokimisë
Diagnostifikimi i kancerit dhe sëmundjeve infektive është një prirje popullore ku teknikat e reja të bazuara në proteomikë dhe gjenomikë përdoren për qëllimin e identifikimit të tumoreve ose qelizave infektive, përhapjes së tyre dhe vendeve të zhvillimit të qelizave dhe analizimit të bazës gjenetike të më të transmetueshmeve dhe sëmundjet jo të transmetueshme. Kjo do të rezultojë në përpunimin dhe dizajnimin e saktë të barnave dhe zhvillimin e terapive të personalizuara për sëmundjet. Hibridizimi në vend (ISH) dhe Imunohistokimia (IHC) janë dy teknika të tilla të përdorura gjerësisht në biologjinë e kancerit dhe ndryshimi kryesor midis hibridizimit in situ dhe imunokimisë qëndron në molekulat që përdoren në procedurën e analizës. Në ISH, sondat e acidit nukleik përdoren në analizë ndërsa, në IHC, antitrupat monoklonal dhe poliklonal përdoren për përcaktimet diagnostike.
Çfarë është Hibridizimi In Situ (ISH)?
Hibridizimi In situ është një teknikë e hibridizimit të acidit nukleik që kryhet drejtpërdrejt në një pjesë ose pjesë të indit, në të gjithë indin ose në qeliza. Teknika varet nga teoria e çiftimit të bazave plotësuese të Watson Crick, duke rezultuar në hibride ADN-ADN ose hibride ADN-ARN të cilat mund të zbulojnë gjenet e mutuara ose të identifikojnë gjenin e kërkuar me interes. Sekuencat e ADN-së me një zinxhir, sekuencat e ADN-së me dy zinxhirë, sekuencat e ARN-së me një zinxhir ose sekuencat oligonukleotide sintetike përdoren si sonda gjatë teknikës së hibridizimit dhe këto sonda etiketohen me një fosfor radioaktiv në skajin e tij 5' për procedurat e identifikimit pas autoradiografisë të etiketuar ose me etiketim dyfluore.. Ekzistojnë lloje të ndryshme të teknikave të ISH në dispozicion bazuar në llojin e sondës së përdorur dhe llojin e teknikës së vizualizimit të ndjekur.
Figura 01: Hibridizimi fluoreshent In Situ
Ka shumë aplikime të ISH, kryesisht në diagnostikimin molekular të sëmundjeve infektive për të identifikuar praninë e patogjenëve dhe për të konfirmuar patogjenin nëpërmjet diagnostikimit molekular. Përdoret gjithashtu në fushat e biologjisë së zhvillimit, kariotipizimit dhe analizës filogjenetike dhe hartës fizike të kromozomeve.
Çfarë është imunohistokimia (IHC)?
Në teknikën e IHC, molekula kryesore e analizuar është antigjeni. Gjatë IHC, antitrupat monoklonale dhe poliklonale përdoren për të përcaktuar praninë e antigjeneve pas infeksionit ose statusit të proliferimit të qelizave malinje. Teknika bazohet në lidhjen antigjen-antitrup dhe për këtë teknikë përdoren etiketat e enzimës; një aplikim i tillë është ELISA (Anzyme linked immunosorbent assay). Shënuesit mund të jenë gjithashtu antitrupa të etiketuar fluoreshente ose antitrupa të etiketuar me radio.
Figura 02: Imunohistokimi
IHC përdoret gjerësisht për zbulimin e qelizave kancerogjene. Procedurat diagnostike synojnë antigjenet e pranishme në qelizat e tumorit për të identifikuar dhe karakterizuar tumorin. E njëjta procedurë është përfshirë për të diagnostikuar agjentët infektivë. Antitrupat monoklonalë dhe poliklonalë përdoren gjithashtu për të analizuar produkte të ndryshme të gjeneve duke mundësuar reaksionin e lidhjes antitrup-antigjen ndërmjet proteinës së dëshiruar dhe antitrupit sintetik të administruar.
Cilat janë ngjashmëritë midis hibridizimit In Situ dhe imunohistokimisë?
- ISH dhe IHC janë reaksione shumë specifike.
- Të dyja teknikat janë shumë të sakta.
- Të dyja teknikat mund të përdoren në diagnostikimin e kancerit dhe sëmundjeve infektive.
- Këto teknika kryhen në mjedise sterile in-vitro.
- Të dyja janë teknika të shpejta që ofrojnë rezultate të riprodhueshme.
- ISH dhe IHC përdorin metoda zbulimi si etiketimi i radios dhe teknikat e fluoreshencës.
Cili është ndryshimi midis hibridizimit in situ dhe imunohistokimisë?
Hibridizimi In Situ vs Imunohistokimi |
|
| ISH është një teknikë e hibridizimit të acidit nukleik që kryhet drejtpërdrejt në një pjesë ose pjesë të indit ose në të gjithë indin. | IHC është një teknikë ku antitrupat monoklonal dhe poliklonal përdoren për të përcaktuar praninë e antigjeneve, të cilët janë shënues të veçantë proteinash të vendosur në sipërfaqet qelizore. |
| Lloji i molekulave bio të analizuara | |
| ISH analizon acidet nukleike. | IHC analizon proteinat-antigjenet. |
| Baza e reaksionit biokimik | |
| Në këtë teknikë ndodh çiftimi i bazës plotësuese midis ADN-ADN ose ADN-ARN. | Ndërveprimet antigjen-antitrup përfshihen në imunohistokimi. |
| Metodat e zbulimit të lidhura me enzimat | |
| Metodat e zbulimit të lidhura me enzimat nuk mund të përdoren në ISH. | Metodat e zbulimit të lidhura me enzimat mund të përdoren në IHC. |
Përmbledhje – Hibridizimi In Situ vs Imunohistokimi
Diagnostifikimi molekular është metoda e shpejtë dhe konfirmuese që mund të përdoret për të identifikuar një sëmundje jo të transmetueshme si kanceri ose sëmundje ngjitëse si HIV ose tuberkulozi bazuar në shënuesit molekularë të pranishëm në qelizat që çojnë në manifestimin e sëmundjes.. Markerët molekularë mund të jenë të pranishëm në formën e proteinave të shprehura ose në nivelin gjenetik, në bazë të të cilit prezantohen teknika të ndryshme të reja për të rritur efikasitetin dhe janë më pak të mundimshëm, megjithëse këto teknika kanë një kosto të lartë. Kështu ISH varet nga formimi hibrid i ADN-ADN ose ADN-ARN, dhe IHC varet nga reaksionet specifike midis antitrupave dhe antigjenit. Ky është ndryshimi midis hibridizimit in situ.
Shkarko versionin PDF të Hibridizimit In Situ vs Imunohistokimi
Mund të shkarkoni versionin PDF të këtij artikulli dhe ta përdorni për qëllime jashtë linje sipas shënimit të citimit. Ju lutemi shkarkoni versionin PDF këtu Dallimi midis Hibridizimit In Situ dhe Imunohistokimisë.
